基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的歐亞旋覆花化學(xué)成分分析與藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、歐亞旋覆花(Inula britannica L.)是一種傳統(tǒng)植物藥，倍半萜內(nèi)酯類和酚酸類成分是歐亞旋覆花中的主要活性成分，但由于種類多樣且含量較低，使其深入研究受到限制。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)具有專屬、快速、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，是復(fù)雜樣品中化學(xué)成分鑒定和定量分析的有力工具。本研究即采用LC-MS技術(shù)對(duì)歐亞旋覆花中的6種倍半萜內(nèi)酯類成分和9種酚酸類成分共15種成分進(jìn)行分析。在總結(jié)倍半萜內(nèi)酯類和酚酸類成分化合物電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律的基

2、礎(chǔ)上，建立歐亞旋覆花中的15種成分的二級(jí)質(zhì)譜庫(kù)；建立歐亞旋覆花中15種成分鑒定及定量的LC-MS分析方法，并用于不同產(chǎn)地的歐亞旋覆花藥材的比較和大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物后該15種成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　第一部分、歐亞旋覆花中15種成分的液質(zhì)聯(lián)用法鑒定及定量分析研究
　　目的：建立一種快速、準(zhǔn)確、可同時(shí)鑒定及定量歐亞旋覆花中15種化學(xué)成分(6種倍半萜內(nèi)酯類成分和9種酚酸類成分)的HPLC-ESI-MS分析方法，并用于歐

3、亞旋覆花藥材分析。
　　方法：建立15種化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)二級(jí)質(zhì)譜庫(kù)，由MRM-IDA-EPI模式對(duì)15種化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，采用MRM正負(fù)離子掃描模式建立其含量測(cè)定方法，并采用所建立的方法對(duì)不同產(chǎn)地的15批歐亞旋覆花藥材進(jìn)行分析。質(zhì)譜條件：ESI源；正負(fù)離子分別監(jiān)測(cè)，6種倍半萜內(nèi)酯類成分采用正離子模式，9種酚酸類成分采用負(fù)離子模式。色譜柱：Sepax GP-C18柱，3μm，100×2.1 mm；柱溫：25℃。流動(dòng)相：乙腈-水(1‰

4、甲酸)梯度洗脫；流速：300μL/min；進(jìn)樣量：5μL。
　　結(jié)果：15種化學(xué)成分在測(cè)定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限和定量限均符合要求。樣品測(cè)定結(jié)果表明，歐亞旋覆花產(chǎn)地是影響15種成分含量的較為重要的因素之一。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，這15種成分主要存在于其花中，莖及地上部分相對(duì)較低。
　　結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、快速、專屬性好，首次建立并應(yīng)用LC-MS方法鑒定及定量分析歐亞旋覆花中15種化學(xué)成分。該法對(duì)于歐亞旋覆花藥

5、材的質(zhì)量控制具有重要意義。
　　第二部分、液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定口服給予歐亞旋覆花提取物后的大鼠血漿中的15種歐亞旋覆花化學(xué)成分及其藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　目的：建立測(cè)定大鼠血漿中15種歐亞旋覆花化學(xué)成分含量的LC-MS方法，并用于大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物后該15種成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　方法：大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物(0.5、1.0、1.5 g/kg)后，分別于給藥后0.083、0.17、0.33、0.5、1、2、4

6、、6、8和12h，眼內(nèi)眥靜脈叢取血，制備血漿樣品，采用液－液萃取方法進(jìn)行樣品預(yù)處理，磺胺甲噁唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)。色譜柱為C18柱，流動(dòng)相為乙腈-水(1‰甲酸)梯度洗脫。采用電噴霧離子源(ESI)，正負(fù)離子模式掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：專屬性和基質(zhì)效應(yīng)考察表明此方法專屬且沒(méi)有顯著的基質(zhì)效應(yīng)。該法各化合物的線性關(guān)系良好，其相關(guān)系數(shù)≥0.99。日內(nèi)和日間檢測(cè)精密度均小于13.6％，日內(nèi)和日間檢測(cè)準(zhǔn)確度均小于11.4％。在

7、穩(wěn)定性試驗(yàn)研究中，旋覆花內(nèi)酯和旋覆花黃酮在大鼠血漿內(nèi)的穩(wěn)定性的相對(duì)誤差(RE)值均小于11.3％?；衔?-6在不同劑量組僅有幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)能夠檢測(cè)到，其余化合物1及化合物7-15在各劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度繪制血藥濃度-時(shí)間(c-t)曲線。以非房室模型計(jì)算大鼠給藥后的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)?；衔?、7-15的Tmax均在0.4 h左右，且Cmax、AUCo-t和AUCo-∞均隨給藥劑量的增加呈線性增加。
　　結(jié)論：該法靈敏度高、選擇性