失笑散含藥血清對大鼠血管平滑肌細(xì)胞細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)的影響.pdf

1、背 景:
　　 動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是心血管系統(tǒng)中最常見的疾病之一，是多種心血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，嚴(yán)重威脅著人們的健康。研究表明血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖是AS 發(fā)生的重要機(jī)制。AS是一種慢性炎癥過程，細(xì)胞間粘附分子-1（Intercellularadhesion molecule-1, ICAM-1）與該過程密切相關(guān)。腫瘤壞死因子α（Tumor necrosisfactor-alpha,TNF-

2、α）可誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC) ICAM-1的表達(dá)，在病變早期，促使單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞粘附、遷移，在進(jìn)展期病變，促進(jìn)已遷入病灶的單核細(xì)胞激化分化成巨噬細(xì)胞,進(jìn)而聚集脂質(zhì)而轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞形成AS,并促進(jìn)淋巴細(xì)胞激活,增加與細(xì)胞間的相互作用,形成更多的巨噬細(xì)胞, 逐漸促使SMC 從血管中層向內(nèi)膜下移行和增殖。這些病理變化在人類動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展中起到非常關(guān)鍵的作用。因此，保護(hù)

3、平滑肌細(xì)胞是AS 防治的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　 失笑散以五靈脂、蒲黃組方，具有活血化瘀，散結(jié)止痛之功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明該方能有效防治動(dòng)脈粥樣硬化，本課題以體外培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的方法，觀察失笑散對腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)的影響,以探討失笑散抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能機(jī)制。
　　 方 法：
　　 1.取雄性SD大鼠,進(jìn)行血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)，取第3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，并以形態(tài)

4、學(xué)觀察和SM α-actin免疫熒光法染色鑒定細(xì)胞。
　　 2.按照血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法制備失笑散含藥血清，將含藥血清分為高、中、低劑量組，MTT 方法檢測各組的細(xì)胞活力。
　　 3.用TNF-α刺激細(xì)胞24h后進(jìn)行分組，實(shí)驗(yàn)分為5組：正常組、TNF-α刺激組、失笑散含藥血清高劑量組、中劑量組、低劑量組，采用流式細(xì)胞術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng),觀察失笑散對腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞細(xì)胞間粘附分子-1蛋白及mRNA水平表達(dá)。

5、
　　 結(jié) 果：
　　 1.細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定結(jié)果 (1)形態(tài)學(xué)觀察：VSMC 接種于培養(yǎng)瓶5-7天后細(xì)胞己基本融合，呈典型的“峰、谷”狀生長. (2) SM α-actin免疫熒光技術(shù)鑒定：顯微鏡下可見95％以上的細(xì)胞質(zhì)呈綠色發(fā)亮熒光。以上結(jié)果證明培養(yǎng)的細(xì)胞為血管平滑肌細(xì)胞。
　　 2.失笑散各劑量組作用24h與同一時(shí)間點(diǎn)正常對照組相比，OD值顯著減少(P＜0.05)，但失笑散各劑量組OD值之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可

6、見失笑散含藥血清對體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞無毒副作用，且具有明顯的抑制作用。
　　 3.TNF-α可誘導(dǎo)VSMC ICAM-1表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01)；而失笑散可降低TNF-α誘導(dǎo)的ICAM-1mRNA水平及蛋白表達(dá)，且呈劑量依賴性(P＜0.01)。
　　 結(jié) 論：
　　 1.失笑散含藥血清對體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞無毒副作用，且具有明顯的抑制作用。
　　 2.失笑散含藥血清通過抑制腫瘤壞死因子a