金鈴子散不同配伍的腸吸收特征研究.pdf

1、1實驗?zāi)康?br>　　 中藥復(fù)方是中醫(yī)傳統(tǒng)理論的精髓和特色,了解其配伍規(guī)律對臨床遣方及優(yōu)化給藥方案有重要的指導(dǎo)意義。中藥復(fù)方多以口服形式入藥,藥物在腸道中的吸收是決定藥物生物利用度和影響藥物發(fā)揮治療作用的關(guān)鍵因素。本研究以金鈴子散作為范例,采用正交設(shè)計的方法,從腸吸收角度,觀察該方組成藥物的代表成分川楝素(TSN)、延胡索甲素(CDL)、延胡索乙素(THP),以其數(shù)、量、相互比例為著眼點,研究金鈴子散不同比例的配伍腸道吸收過程中的動態(tài)

2、變化規(guī)律,以及組成藥物的影響大小和形式等,并以數(shù)學(xué)方程和圖解對其進行描述,借以探討中藥復(fù)方的配伍原理以及科學(xué)性。
　　 2實驗方法和結(jié)果
　　 2.1金鈴子散組方及其配伍的腸外翻吸收研究
　　 方法:采用L9(34)正交設(shè)計表,將金鈴子散組方中的川楝子和延胡索作為兩因素,每個因素設(shè)3個不同劑量作為實驗的三水平,研究金鈴子散9個不同配比及其相應(yīng)的單味藥物在腸道中的吸收。借助腸外翻模型,以金鈴子散中代表成分TSN、C

3、DL、THP為檢測對象,利用HPLC檢測三個代表成分在單味藥和不同配比方中的經(jīng)時吸收量,計算各成分在不同腸段的K值。通過正交極差分析、方差分析以及歸一化加權(quán)綜合評分法對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:川楝子提取物中TSN和延胡索提取物中CDL、THP相同成分在不同腸段吸收形式一致,均為零級吸收(R2>0.95),以被動轉(zhuǎn)運為主要轉(zhuǎn)運形式,各腸段吸收總趨勢在小腸不同腸段吸收相近,均大于在結(jié)腸的吸收；其中THP的腸吸收較好,各

4、腸段吸收率均大于40％,甚至高者達到70％以上；TSN和CDL,的腸吸收較差,各腸段吸收率在20％以下。
　　 正交設(shè)計研究顯示金鈴子散中川楝子和延胡索在不同配伍比例時在腸道的吸收動力學(xué)不同。相同成分在腸道不同部位的吸收趨勢大致相同,不同成分的最佳吸收組合有所不同；在本實驗設(shè)計的因素水平中,TSN、CDL、THP在最佳腸吸收時川楝子和延胡索的配比分別為:4:3(TSN),4:3(CDL),1:3(THP)。對歸一化后綜合評分結(jié)果

5、進行正交統(tǒng)計,同時選用雙變量Spreaman相關(guān)和回歸分析各藥的作用大小和形式,最終得出最優(yōu)配比。結(jié)果顯示在本研究實驗設(shè)計中,不同腸段所得的結(jié)果一致,川楝子的對全方腸吸收的影響程度稍大于延胡索,其吸收最優(yōu)配伍為川楝子:延胡索=4:3(9＃)。其次是3:3(6#)和4:2(8#})兩配伍方。
　　 2.2金鈴子散單方及優(yōu)選配伍組方在Caco-2細胞中的吸收研究
　　 方法:利用Caco-2細胞類似小腸上皮細胞的特性,研究中

6、藥提取物及其配伍在細胞中的攝取和轉(zhuǎn)運特征。攝取實驗:將細胞接種于24孔板,測定加藥1h后的細胞內(nèi)藥物攝取量；轉(zhuǎn)運實驗:將細胞接種到Millicell小室膜上,待細胞生長21d具有極性、分化完成,選取完整性良好的小室進行轉(zhuǎn)運實驗,實驗時分別將藥物加入AP或BL側(cè),檢測接收端的目標(biāo)成分,分析藥物吸收／外排量的變化。
　　 結(jié)果:細胞生長21天堿性磷酸酶活力AP側(cè)為BL側(cè)的2倍以上(P<0.05),說明細胞具有極性,分化完成；熒光素鈉

7、在2h其透過率小于1％,TEER值達到500Ω·cm2,證明Caco-2細胞完整性較好,可用于轉(zhuǎn)運實驗。
　　 Caco-2細胞實驗進一步表明。TSN、CDL、THP以被動轉(zhuǎn)運為主,Pb-a／Pa-b比例均在1左右。金鈴子散不同配伍比例時,各代表成分在細胞中的攝取和轉(zhuǎn)運均發(fā)生相應(yīng)改變。川楝子和延胡索配伍后可見CDL的攝取有降低趨勢,其吸收和外排明顯降低(P<0.05)；而THP無論是在攝取、轉(zhuǎn)運方面均有大幅度的升高(P<0.05

8、、P<0.01)。在Caco-2實驗中THP的吸收率明顯高于CDL；川楝子和延胡索配伍后對TSN的攝取明顯增加(P<0.05),但在細胞吸收和外排方面并未見明顯的變化。
　　 3結(jié)論
　　 本實驗利用腸外翻模型和Caco-2細胞模型,研究金鈴子散組方中單味藥物和不同配伍中代表成分的吸收變化情況,結(jié)果顯示,金鈴子散組成藥物川楝子和延胡索中代表成分在腸道中的吸收機制均以被動轉(zhuǎn)運為主要形式,兩藥配伍比例不同時,全方的腸吸收程度