基于腸吸收研究四逆散中藥對(duì)配伍機(jī)理.pdf

1、四逆散由芍藥、枳實(shí)、柴胡、甘草四味中藥組成,為《傷寒論》中疏肝解郁的名方。該方包含了四個(gè)配伍特色明顯的藥對(duì):柴胡.枳實(shí)(一升一降)、柴胡.芍藥(一散一收)、芍藥-甘草(典型鎮(zhèn)痛方)、芍藥-枳實(shí)(理氣方)。藥對(duì)是中醫(yī)臨床常用的相對(duì)固定的兩藥味的配伍組合,組成簡(jiǎn)單卻具備配伍的基本特征。本文以藥對(duì)研究為切入點(diǎn),從腸吸收的角度,應(yīng)用Caco-2細(xì)胞模型及大鼠在體腸灌流模型圍繞以柴胡為主的兩個(gè)藥對(duì)及芍藥-甘草藥對(duì)配伍的腸吸收特性進(jìn)行了研究,為四逆

2、散配伍機(jī)理的研究提供基礎(chǔ)。
　　 本論文首先分別對(duì)中藥藥對(duì)、四逆散的研究進(jìn)展及口服藥物吸收代謝的評(píng)價(jià)方法等方面進(jìn)行了文獻(xiàn)綜述,在本課題已有研究基礎(chǔ)上,實(shí)驗(yàn)部分主要完成了以下研究:
　　 1.建立了藥對(duì)中各主成分生物樣品的分析方法。
　　 在已建立大鼠腸灌流分析方法的基礎(chǔ)上,建立了枳實(shí)中主成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷,芍藥中土成分芍藥苷及芍藥提取物,甘草中主成分甘草酸、甘草苷、甘草次酸及甘草提取物Caco-2細(xì)胞樣

3、品的超高效液相分析方法,以及柴胡皂苷a、柴胡皂苷d大鼠腸灌流樣品的LC-MS分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建方法準(zhǔn)確、可靠。
　　 2.柴胡-枳實(shí)藥對(duì)主成分配伍腸吸收特性的研究。
　　 應(yīng)用Caco-2細(xì)胞模型研究了枳實(shí)中主成分枘皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的腸吸收特性,結(jié)果表明20μmol·L-1柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷吸收滲透性系數(shù)分別為0.791×10-6 cm·s-1、0.805×10-6由cm·s-1、0.853×10-6

4、 cm·s-1,吸收均較差。柴胡-枳實(shí)主成分配伍后,柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的吸收滲透系數(shù)均明顯增加(p<0.05):柴胡皂苷a、d分別配伍柚皮苷、橙皮苷、新橙皮后,使柚皮苷吸收滲透系數(shù)分別增加了2.6、2.8倍；橙皮苷吸收滲透系數(shù)均增加了2.4倍；新橙皮苷吸收滲透系數(shù)分別增加了1.4、1.8倍。
　　 應(yīng)用大鼠在體腸灌流模刑研究,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的腸吸收特性,柴胡皂苷a在各腸段的有效滲透系數(shù)(P*efr值)按十二指腸、空

5、腸、回腸、結(jié)腸順序依次分別為0.193±0.028,0.207±0.012,0.361±0.014,0.239±0.042柴胡皂苷d分別為0.228±0.036,0.283±0.022,0.370±0.055,0.399±0.084.,結(jié)果表明柴胡皂苷a與柴胡皂苷d的吸收均較差。柴胡-枳實(shí)主成分配伍在大鼠腸灌流模型中的研究表明,柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分別與柴胡皂苷a以濃度比1:1配伍灌流后,在回腸、結(jié)腸段的P*eff值和吸收百分率明顯

6、增加(p<0.05):枘皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的P*eff值回腸分別增加了2.38、2.02、2.20倍,吸收百分率分別增加了1.69、1.51、1.33倍；P*eff值結(jié)腸分別增加了1.70、1.65、1.84倍,吸收百分率分別增加了1.10、1.22、1.05倍。柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分別與柴胡皂苷d以濃度比1:1配伍灌流后,在叫腸、結(jié)腸段的P*eff值和吸收百分率明顯增加(p<0.05):柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的P*eff值回

7、腸分別增加了3.73、3.36、3.95倍,吸收百分率分別增加了2.62、2.50、2.50倍；P*eff值結(jié)腸分別增加了2.66、2.86、3.01倍,吸收百分率分別增加了1.89、2.13、1.76倍。
　　 Caco-2細(xì)胞模型與大鼠在體腸灌流模型結(jié)果均表明柴胡皂苷a、柴胡皂苷d能夠明顯增加枘皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的吸收,因?yàn)榭赡苁遣窈碥誥、柴胡皂苷d打開了Caco-2細(xì)胞或大鼠腸道上皮細(xì)胞間的緊密連接。
　　

8、3.柴胡-芍藥藥對(duì)主成分配伍腸吸收特性的研究。
　　 應(yīng)用Caco-2細(xì)胞模型研究了芍藥苷的腸吸收特性。芍約苷的表觀吸收滲透系數(shù)為0.976×10-66 cm·s-1,結(jié)果表明芍藥苷吸收較差。加入P-gp抑制劑維拉帕米后,芍約苷的吸收滲透系數(shù)明顯增加(p<0.05),外排比率降低了57％,推測(cè)芍藥苷可能為P-gp的底物。柴胡-芍藥藥對(duì)主成分配伍研究表明柴胡皂苷a、柴胡皂苷d能夠明顯增加芍藥苷的滲透系數(shù)(p<0.05):柴胡皂苷a

9、、柴胡皂苷d分別與芍藥苷配伍后,使芍藥苷滲透系數(shù)分別為2.32×10-6cm·s-1、2.48×10-6 cm·s-1,是單體芍藥苷的2.37、2.54倍。
　　 應(yīng)用大鼠在體腸灌流模型研究了柴胡-芍藥藥對(duì)配伍的腸吸收特性。芍藥苷與柴胡皂苷a以濃度比1:1配伍灌流,芍藥苷在各腸段的有效滲透系數(shù)(P*eff)在回腸、結(jié)腸段的P*eff值和吸收百分率明顯增加(p<0.05):P*eff值和吸收百分率回腸分別增加了2.11、1.40倍

10、,結(jié)腸分別增加了1.90、1.25倍；與柴胡皂苷d以濃度比1:1配伍灌流,芍藥苷在回腸、結(jié)腸段的P*eff值和吸收百分率明顯增加(p<0.05):P*eff值和吸收百分率回腸分別增加了2.42、1.63倍,結(jié)腸分別增加了2.18、1.51倍。
　　 Caco-2細(xì)胞模型與大鼠在體腸灌流模型結(jié)果均表明柴胡皂苷a、柴胡皂苷d能夠明顯增加芍藥苷的吸收。
　　 4.芍藥-甘草藥對(duì)配伍腸吸收特性的研究。
　　 首先,應(yīng)用C

11、aco-2細(xì)胞模型研究了單體化合物的腸吸收特性。甘草苷、甘草酸的吸收較差,表觀吸收滲透系數(shù)分別為0.939×10-6 cm·s-1、0.359×10-6 cm·s-1,甘草次酸的吸收較好,表觀吸收滲透系數(shù)為13.6×10-6 cm·s-1。加入P-gp抑制劑維拉帕米后,甘草苷的吸收滲透系數(shù)明顯增加(p<0.05),外排比率降低了50％,推測(cè)甘草苷可能為P-gp的底物。
　　 其次,重點(diǎn)探討了芍藥中主成分與甘草中的主成分不同濃度比

12、例配伍的腸吸收特性。芍約苷與甘草酸、甘草苷、甘草次酸以不同濃度比例(5:1,1:1,1:5)分別配伍,結(jié)果表明:甘草酸能夠明顯降低芍藥苷的吸收滲透系數(shù)(p<0.05),分別降低了90％、67％和75％；甘草苷同樣能夠明顯降低芍藥苷的吸收滲透系數(shù)(p<0.05)；而甘草次酸能夠明顯增加芍藥苷的吸收滲透系數(shù)(P<0.05),分別是單體芍藥苷的1.18、1.41和2.04倍。甘草酸、甘草苷、甘草次酸分別與芍藥苷以不同濃度比例(5:1,1:1,

13、1:5)配伍后,結(jié)果表明:當(dāng)配伍比例為5:1和1:5時(shí),甘草苷的吸收滲透系數(shù)明顯降低(p<0.05),分別降低了35％、77％。
　　 芍藥甘草提取物配伍后,芍藥苷吸收滲透系數(shù)與芍藥提取物相比增加了42％(P<0.05),吸收滲透系數(shù)為1.96×10-6 cm·s-1。甘草提取物中甘草酸的吸收滲透系數(shù)與甘草提取物中甘草酸相比增加了1.69倍(P<0.05),吸收滲透系數(shù)為0.946×10-6 cm·s-1。
　　 綜合上

14、述結(jié)果表明提取物配伍與單體成分配伍的結(jié)果不一致。芍藥甘草提取物配伍后,芍藥苷與甘草酸的吸收均明顯增加,可能由于提取物中的其他成分促進(jìn)芍藥苷與甘草酸的吸收。對(duì)于單體成分的配伍結(jié)果表明甘草中主成分甘草酸、甘草苷能夠降低芍藥中主成分芍約苷的吸收滲透系數(shù),因?yàn)榭赡転楦什菟?、甘草苷能夠增?qiáng)P-gp的作用,從而減少芍藥苷的吸收。而甘草次酸能夠增加芍藥苷的滲透系數(shù),因?yàn)榭赡転楦什荽嗡崮軌蛞种芇-gp的作用,增加芍藥苷的吸收。芍藥苷能夠降低甘草苷的吸收