川芎嗪對NB4細(xì)胞端粒酶活性的影響及其抗腫瘤分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過檢測川芎嗪(TMP)對NB4細(xì)胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影響，以及對人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)、c-myc mRNA表達(dá)水平的影響，探討TMP抗腫瘤的作用機(jī)制。
　　方法：采用MTT法檢測不同濃度(100ug/ml、300ug/ml、500ug/ml)不同作用時間(24h、48h、72h)的TMP對NB4細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率；TRAP-PCR銀染

2、法定性檢測端粒酶活性；TRAP-PCR-ELISA法定量檢測端粒酶活性；RT-PCR法檢測hTERT、c-myc mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示濃度100ug/ml-500ug/ml的TMP能明顯抑制NB4細(xì)胞的增殖，且其抑制作用呈劑量時間依賴性；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示濃度300ug/ml、500ug/ml的TMP作用NB4細(xì)胞48h、72h后，細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.05)；PCR-TRAP銀染法定性檢測端粒酶活性結(jié)果

3、顯示各濃度組的TMP作用NB4細(xì)胞72h后，條帶明顯變淺；PCR-TRAP-ELISA法定量檢測端粒酶活性結(jié)果顯示各濃度組的TMP作用NB4細(xì)胞72h后，端粒酶活性(A450nm)顯著降低(P<0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示NB4細(xì)胞的hTERT、c-myc mRNA表達(dá)水平隨TMP濃度增加、作用時間延長逐漸降低，且二者降低程度呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：本實驗顯示在NB4細(xì)胞中TMP通過下調(diào)c-myc的表達(dá)來抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋