端粒酶hTR反義核酸對白血病細(xì)胞端粒酶活性及對化療藥物誘導(dǎo)凋亡的影響.pdf

1、目的：研究端粒酶hTR反義核酸對K562、HL-60細(xì)胞端粒酶活性的影響；并探討白血病細(xì)胞的端粒酶活性受到抑制后,對化療藥物誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的影響。方法：采用端粒酶多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-酶聯(lián)免疫測定法(PCR-ELISA)檢測白血病細(xì)胞端粒酶活性；以臺盼藍(lán)拒染法計數(shù)細(xì)胞數(shù)；姬姆薩(Giemsa)染色、Annexin V和PI雙染色法觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)變化；瓊脂糖凝膠電泳分析凋亡細(xì)胞的DNA斷裂特征；通過流式細(xì)胞儀對細(xì)胞凋亡峰進(jìn)行定量分析。結(jié)

2、果：K562、HL-60細(xì)胞均表達(dá)高水平的端粒酶活性,經(jīng)hTR反義核酸作用后,K562及HL-60細(xì)胞端粒酶活性下降；hTR正義核酸無上述作用。hTR反義核酸作用于K562、HL-60細(xì)胞24小時后,再加入柔紅霉素、阿糖胞苷、足葉乙甙,對細(xì)胞生長的抑制分別與hTR正義核酸聯(lián)合柔紅霉素、阿糖胞苷、足葉乙甙及單用柔紅霉素、阿糖胞苷、足葉乙甙相比較,統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差(P>0.05)；但是hTR反義核酸作用于K562、HL-60細(xì)胞24小時后

3、,再加入順鉑,對K562、HL-60細(xì)胞生長的抑制作用,與單用順鉑組相比較有顯著差異(P<0.05),而hTR正義核酸無上述作用。姬姆薩(Giemsa)染色、Annexin V和PI雙染色法觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)變化中,單用順鉑組、hTR正義核酸與順鉑聯(lián)合組、hTR反義核酸與順鉑聯(lián)合應(yīng)用組均見到典型的凋亡細(xì)胞；順鉑作用于K562、HL-60細(xì)胞,48小時見到少量凋亡細(xì)胞；hTR反義核酸與順鉑聯(lián)合應(yīng)用,48小時觀察凋亡細(xì)胞明顯增加；而hTR正

4、義核酸與順鉑聯(lián)合應(yīng)用,48小時觀察凋亡細(xì)胞的數(shù)量,與單用順鉑組則無明顯變化。hTR反義核酸作用于K562、HL-60細(xì)胞,24小時再加入順鉑5μmol/L,至48小時細(xì)胞DNA瓊脂糖凝膠電泳可見相隔180-200bp的梯狀DNA條帶。細(xì)胞對照組、單用順鉑組、hTR正義核酸與順鉑聯(lián)合應(yīng)用組在48小時,均未見到明顯的梯狀DNA條帶。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,hTR反義核酸聯(lián)合順鉑(5pmd/I。)組作用于陽62、隊-60細(xì)胞凋亡率明顯高于單用順鉑組