不同品種仔豬TLRs表達規(guī)律及VA對仔豬TLRs表達量影響的研究.pdf

1、TOLL樣受體(Toll-like receptors, TLRs)是參與天然免疫的細胞跨膜受體及病原模式識別受體，它通過啟動天然免疫反應和激發(fā)適應性免疫反應的信號傳導，在宿主防御微生物病原體感染過程中發(fā)揮重要作用。維生素A作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，對動物的抗感染能力和體內(nèi)一些基因表達的影響十分明顯。然而，目前尚無維生素A對不同品種豬TLRs基因表達影響的報道。本研究旨在比較考察不同品種仔豬TLRs表達規(guī)律的基礎上，研究揭示VA對不同品種仔豬

2、不同感染狀態(tài)下組織TLRs表達量的影響。本研究共包括以下兩個試驗。
　　 試驗一榮昌仔豬和DLY仔豬TLRs基因表達發(fā)育規(guī)律
　　 試驗采用2×4因子設計，即榮昌豬和DLY豬2個品種、4個日齡階段(0、7、14和21d)，比較考察地方仔豬和外種仔豬TLRs的基因發(fā)育表達規(guī)律。選取純種榮昌仔豬和DLY仔豬各4窩，在仔豬出生后的0、7、14和21d，每窩各選1頭正常仔公豬屠宰，分離肝臟、脾臟、肺、空腸和腸系膜淋巴結(jié)樣品，液氮

3、速凍。用Real-time PCR方法檢測組織中TLR2,3,4,7,9基因mRNA的表達水平。
　　 結(jié)果表明，不同品種仔豬肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸組織中TLR2、3、4、7、9的mRNA表達量存在差異，榮昌豬顯著高于DLY豬(P＜0.05)；并且表達量隨日齡增加呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律，總體是隨著日齡的增加，表達量顯著增加P＜0.05)。
　　 試驗二維生素A對藍耳病疫苗接種不同品種仔豬TLRs的表達及
　　

4、 免疫力的影響
　　 選擇健康、21日齡斷奶、體重3.5～4kg的榮昌仔豬和體重6.5～7kg的DLY仔豬各24頭，在試驗的前2周兩個品種的仔豬均采食相同的VA缺乏日糧，仔豬單籠飼養(yǎng)；2周后，分別將兩個品種的仔豬按體重隨機分為2個處理，分別繼續(xù)飼喂VA缺乏日糧和正常VA日糧(VA添加量2200IU/kg)，即為2×2因子設計共4個處理，主效應分別為2個品種(榮昌和DLY)和2個VA添加水平(0和2200IU/kg)，每個處理12

5、個重復；繼續(xù)飼喂2周后，再將每個處理一分為二，分別注射PBS液和藍耳病弱毒疫苗(PRRSV)，即為2×2×2因子設計共8個處理，主效應分別為2個品種(榮昌和DLY)、2個VA添加水平(0和2200IU/kg)、2種疫苗免疫狀態(tài)(注射PBS液和注射藍耳病弱毒疫苗)，每個處理6個重復，每個重復1頭仔豬：試驗繼續(xù)2周后，所有試豬麻醉后采樣待測。同時，在試驗的第2、4和6w末仔豬前腔靜脈采血，分離血清待測。研究結(jié)果表明：
　　 1、不同

6、VA營養(yǎng)狀態(tài)模型建立。第2、4、6w末時血清視黃醇濃度DLY豬顯著高于榮昌豬。隨飼喂VA缺乏日糧時間的延長，兩個品種仔豬血清視黃醇濃度均呈下降趨勢，采食補充VA日糧后血清視黃醇含量增加。第4和6w末缺乏組血清VA含量較補充組分別降低9％和25.11％。同時，接種PRRSV加劇了血清視黃醇濃度的降低。
　　 2、PRRSV攻毒模型建立。血清中PRRSV抗體檢測結(jié)果表明，所有試豬在第35d的血清中均未檢測到PRRSV陽性，第42d的

7、血清中，接種PRRSV的24頭仔豬血清中均檢測到PRRSV陽性。同時，第42d末接種PRRSV仔豬的肺和呼吸道組織中均檢測到PRRSVmRNA，而未接種組均未檢出。
　　 3、不同品種豬的ADG和ADFI差異顯著，DLY豬的ADG(P＜0.0001)和ADFI(P＜0.0001)均顯著高于榮昌豬。攻毒顯著降低了ADG(P＜0.0001)和ADFI(P=0.0036)，顯著升高了料重比(P＜0.0001)，且對DLY仔豬的影響程度

8、顯著強于榮昌仔豬(P＜0.0001)。
　　 4、第4w末DLY仔豬血清IFN.γ濃度顯著低于榮昌豬(P＜0.05),IL-2和IL-4濃度品種間差異不顯著。維生素A水平、品種與維生素A互作對血清IFN-γ、IL-2和IL-4濃度無顯著影響。第6w末，DLY豬血清IFN-γ,IL-2,IL-4濃度略低于榮昌豬，差異不顯著。除動物品種、維生素A水平和攻毒三者互作(P=0.0251)對血清IL-2的濃度產(chǎn)生顯著影響外，品種、維生素A

9、水平、攻毒以及三者間的兩兩互作均未對血清IL-2和IL-4濃度產(chǎn)生顯著影響。除攻毒(P=0.0030)對血清IFN-γ濃度產(chǎn)生顯著影響外，動物品種、維生素A水平以及三者間的兩兩互作均未對血清IFN-γ濃度產(chǎn)生顯著影響。
　　 5、豬品種、日糧VA水平、PRRSV的攻毒狀態(tài)，以及它們間的互作影響TLRsmRNA的組織表達量。榮昌仔豬各組織TLR2、3、7、9的mRAN表達量均高于DLY仔豬，其中榮昌豬肝臟、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸中

10、TLR2、TLR3、TLR7(肺例外)和TLR9(肝和腸系膜淋巴結(jié)除外)的mRNA表達量均顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于DLY仔豬。除脾臟外，VA缺乏均導致組織TLR2、3、7、9的mRAN表達量顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)增加。PRRSV攻毒導致各組織中TLR2、3、7、9的mRAN表達量均有不同程度增加，對各組織中TLR7和TLR9的影響大于TLR2和TLR3。品種×VA、品種×攻毒、VA×攻毒、品

11、種×VA×攻毒對組織TLR2、3、7、9的mRNA表達量存在不同程度的互作影響。
　　 綜上所述，本研究結(jié)果表明，不同品種豬肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸等組織中TLR2、3、4、7、9的mRNA表達量存在差異，榮昌豬高于DLY豬，并且表達量隨日齡增加總體呈顯著增加。接種PRRSV后，不同品種間仍表現(xiàn)為榮昌豬組織TLR2、3、7、9基因表達量高于DLY豬。不同品種間的抵抗力可能與TLRs的表達有關(guān)。接種PRRSV上調(diào)了仔豬機體T