DEV感染對(duì)鴨主要TLRs轉(zhuǎn)錄水平影響研究.pdf

1、鴨腸炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)又稱鴨瘟病毒(Duck plague virus，DPV)，是危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要病原之一。目前對(duì)DEV的研究主要集中在基因結(jié)構(gòu)與功能、快速檢測(cè)技術(shù)及誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)等方面，但在 DEV感染與鴨天然免疫應(yīng)答方面研究較少。Toll樣受體(Toll like receptors，TLRs)作為一種天然免疫分子，可通過(guò)機(jī)體自身的表面模式識(shí)別受體識(shí)別病原微生物的損傷相關(guān)分子

2、模式并激活胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，誘導(dǎo)炎性因子以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生，最終達(dá)到清除入侵病原體的目的。因此，本文開(kāi)展了DEV感染對(duì)鴨TLRs基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞因子分泌的影響研究，以期為鴨病毒性腸炎(鴨瘟)的預(yù)防與控制提供新思路。主要研究?jī)?nèi)容包括：
　　1．健康鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平
　　根據(jù)GenBank上鴨TLR2、TLR3、TLR7和β-actin基因設(shè)計(jì)特異性引物，以β-actin為內(nèi)參，采用實(shí)時(shí)熒光定量P

3、CR對(duì)鴨機(jī)體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：TLR2、TLR3和TLR7基因 mRNA在所檢測(cè)組織中均有不同程度轉(zhuǎn)錄，其中TLR2基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高，依次是肝臟、胰臟、腎臟、氣管、肺臟、十二指腸、肌肉、心臟和腦；TLR3基因在肝臟中轉(zhuǎn)錄最高，依次是腎臟、脾臟、氣管、心臟、肺臟、胰臟、肌肉、十二指腸和腦；TLR7基因在脾臟中轉(zhuǎn)錄最高，依次是肝臟、胰臟、肺臟、氣管、十二指腸、腎臟、肌肉和腦。
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4、．DEV感染對(duì)鴨組織中TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄的影響
　　采集DEV感染后不同時(shí)間段鴨組織樣本，提取組織樣本總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)鴨機(jī)體組織TLR2、TLR3和TLR7基因轉(zhuǎn)錄量進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與正常組相比較，TLR2、TLR3和TLR7基因在鴨體不同組織中轉(zhuǎn)錄均發(fā)生不同程度變化，其總體趨勢(shì)是，隨著DEV感染時(shí)間的推進(jìn)，三種Toll樣基因轉(zhuǎn)錄呈現(xiàn)倒“S”變化，即先升高后降低再升高的現(xiàn)象，但Toll樣

5、受體基因在同一感染時(shí)間上不同鴨體組織的轉(zhuǎn)錄變化未呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。
　　3．DEV感染對(duì)鴨血清和外周淋巴細(xì)胞中細(xì)胞因子分泌的影響
　　采集DEV感染后不同時(shí)間段鴨血清樣本，采用ELISA測(cè)定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DEV感染后鴨血清中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化，其中IL-2在6h時(shí)最高，120h時(shí)最低；IL-6在72h前趨于穩(wěn)定，

6、96h時(shí)降到最低；IL-8在6h時(shí)最高，96h時(shí)最低；IFN-β開(kāi)始時(shí)降低，6~48h時(shí)升高，后又降低，至96h時(shí)開(kāi)始上升；IFN-γ在6h時(shí)最高，18~120h時(shí)呈整體下降趨勢(shì)，至168h時(shí)升高。
　　分離健康鴨血液中外周淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)呈單層細(xì)胞后，感染 DEV，收集感染后不同時(shí)間細(xì)胞樣本，采用ELISA方法測(cè)定IL-2、IL-6、IL-8、IFN-β和IFN-γ含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DEV感染后鴨外周淋巴細(xì)胞中IL-2、IL-6、I

7、L-8、IFN-β和IFN-γ分泌均發(fā)生不同程度的變化，其中IL-2和IL-6呈現(xiàn)持續(xù)上升，至4h后分泌趨于穩(wěn)定；IL-8在1h時(shí)開(kāi)始下降，4h時(shí)上升至最高，8h時(shí)下降，12h上升；IFN-β在1h時(shí)開(kāi)始上升，4~8h時(shí)持續(xù)下降，12h時(shí)上升；IFN-γ在1h時(shí)無(wú)變化，4h時(shí)上升，8h時(shí)下降，12h時(shí)上升。
　　結(jié)論：TLR2、TLR3和TLR7基因在正常鴨組織中具有不同程度的轉(zhuǎn)錄，感染DEV后其轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生一定的變化，總體趨勢(shì)沒(méi)