仔豬源乳酸菌的篩選及其對(duì)仔豬作用的影響.pdf

1、本研究旨在分離、篩選優(yōu)良同源乳酸菌株，將其制成高活性復(fù)合菌制劑應(yīng)用于仔豬生產(chǎn)。試驗(yàn)從豬糞便中初步分離出30株乳酸菌，通過(guò)體外篩選得到4株優(yōu)良菌株，鑒定此4株菌分別是屎腸球菌、雞腸球菌、嗜酸乳桿菌、口乳桿菌，將其混合培養(yǎng)，以MRS組成為依據(jù)，設(shè)計(jì)并篩選出低成本、較高活性的最佳培養(yǎng)基。最后將此4株菌制成固體復(fù)合菌制劑應(yīng)用于仔豬并與抗生素作對(duì)比，為乳酸菌在仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 1、菌株的分離、篩選、鑒定
　　

2、試驗(yàn)將MRS半選擇性培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至pH=5.0，從28日齡健康仔豬糞便初步分離出30株革蘭氏陽(yáng)性、無(wú)芽孢乳酸菌。分別編號(hào)：R1、R2、…R29、R30。
　　 通過(guò)耐酸、耐膽鹽、抑菌、產(chǎn)酸進(jìn)行體外模擬法篩選試驗(yàn)。在pH值2.5處理2h后存活率超過(guò)30％的菌株13株；將此13株菌株通過(guò)濃度為0.3%的膽鹽后存活率超過(guò)10%的菌株剩7株。采用牛津杯法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，從7株菌中篩選出對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌有較強(qiáng)抑菌作用且抑菌圈直徑在18mm

3、以上的菌株有4株，對(duì)此4株菌株進(jìn)行產(chǎn)酸試驗(yàn)驗(yàn)證，都表現(xiàn)出pH<4.0強(qiáng)的產(chǎn)酸能力。4株菌分別是R11、R15、R18、R22。
　　 通過(guò)顯微鏡(10×100)可初步觀察R11、R15為球菌，R18、R22為桿菌；再通過(guò)菌落形態(tài)特征與過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、硝酸還原試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、pH9.2和pH9.6生長(zhǎng)試驗(yàn)、4%NaCl、I6.5%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)、葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)，可確定R11、R15屬于乳

4、酸菌中的腸球菌屬，R18.R22屬于乳酸菌中的乳酸桿菌屬：再通過(guò)精氨酸產(chǎn)氨試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、各類糖、醇發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)行種鑒定，R11、R15、R18、R22分別是屎腸球菌、雞腸球菌嗜酸乳桿菌、口乳桿菌。
　　 2、菌株的復(fù)合
　　 將活化4株菌的菌液菌數(shù)調(diào)節(jié)至同一數(shù)量級(jí)，取等體積菌液按10%(v/v)接種，進(jìn)行單獨(dú)與混合培養(yǎng)，同時(shí)測(cè)定菌株OD值?；旌吓囵B(yǎng)后的4株菌經(jīng)涂板查數(shù)、菌落特征、鏡檢、部分鑒定試驗(yàn)，平皿上四株菌都存活且

5、菌數(shù)(CFU/mL)為R11>R22>R18>R15；生長(zhǎng)曲線測(cè)定表明混合培養(yǎng)OD值高于任何一株單獨(dú)培養(yǎng)菌株，說(shuō)明四株菌混合培養(yǎng)優(yōu)于單獨(dú)培養(yǎng)，即復(fù)合菌制劑更為理想。將菌液與載體(麥麩與豆粕粉碎1:1混合)1:1(m/m)混合，陰干避免結(jié)塊，密封干燥低溫保存。
　　 3、生產(chǎn)培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與選擇
　　 設(shè)計(jì)四個(gè)培養(yǎng)基，以豆粕、玉米面為主要原料。試驗(yàn)結(jié)果表明培養(yǎng)基Ⅱ組成成分最佳，菌液菌數(shù)可以高達(dá)1011～1012CFU/mL與配

6、方Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ差異顯著(P<0.05)；pH可降低到3.49，與單株菌在此培養(yǎng)基培養(yǎng)pH差異顯著(P<0.05)。
　　 4、乳酸菌制劑在乳豬(7-28日齡)與斷奶仔豬(29-60日齡)上的應(yīng)用
　　 復(fù)合乳酸菌制劑按0.2%比例添加到哺乳與斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中，并與抗生素組作對(duì)照進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。選擇體重、窩仔數(shù)、母豬胎次、出生日期相近的純種長(zhǎng)白仔豬6窩，按飼養(yǎng)試驗(yàn)要求隨機(jī)分為2個(gè)處理，每個(gè)處理3窩仔豬，每窩10頭仔豬，分別飼