姜黃素腸吸收機(jī)制及針炙干預(yù)作用的初探.pdf

1、本課題圍繞姜黃素胃腸難吸收,生物利用度低的突出問題進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。采用離體大鼠翻轉(zhuǎn)腸囊法、在體大鼠腸灌流法、Caco-2細(xì)胞模型試探性研究姜黃素的腸吸收機(jī)制。并在此基礎(chǔ)上,通過針灸干預(yù)大鼠的胃腸穴位,探討針灸對(duì)姜黃素腸吸收的影響。也為提高某些胃腸難吸收藥物的生物利用度提供新的思路。
　　 本研究主要包括以下內(nèi)容:
　　 1.觀察姜黃素在大鼠腸道中的穩(wěn)定性和腸壁物理吸附等,為腸吸收機(jī)制實(shí)驗(yàn)的展開提供條件依據(jù)。采用HPLC法檢

2、測(cè)姜黃素在2h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的剩余濃度,并采用紫外分光光度法檢測(cè)姜黃素的腸壁物理吸附率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:姜黃素在2h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的剩余濃度與0h相比無顯著性差異(p＞0.05),姜黃素的C2h/C0h(物理吸附率)均大于98％。姜黃素在正常體溫空白腸液中的穩(wěn)定性好。大鼠腸壁組織對(duì)藥物沒有明顯的非特異性物理吸附。結(jié)論:空白腸溶液可以保持姜黃素的穩(wěn)定狀態(tài),外界環(huán)境對(duì)姜黃素的影響較小,可以進(jìn)行姜黃素腸吸收機(jī)制的實(shí)驗(yàn)。
　　 2.通過觀察維拉帕

3、米對(duì)姜黃素的腸吸收速率和表觀滲透系數(shù)的影響,探討姜黃素腸吸收機(jī)制。采用大鼠在體腸灌流法觀察姜黃素在回腸段的吸收速率分?jǐn)?shù)(Ka)和表觀滲透系數(shù)(Papp)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:當(dāng)姜黃素由低濃度增加到高濃度時(shí),其吸收速率(Ka)和表觀滲透系數(shù)(Papp)都呈下降趨勢(shì)。由此可見,姜黃素在實(shí)驗(yàn)濃度條件下,回腸段的吸收并非簡(jiǎn)單性質(zhì)的被動(dòng)擴(kuò)散,呈現(xiàn)飽和性的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)特征。濃度5μg/mL姜黃素合用維拉帕米時(shí),其Ka值和Papp值都有所增加。結(jié)論:可能

4、是維拉帕米競(jìng)爭(zhēng)性拮抗P-gp。減弱了P-gp在回腸中對(duì)姜黃素的外排作用,增加了姜黃素的吸收。
　　 3.采用離體大鼠翻轉(zhuǎn)腸囊法觀察維拉帕米對(duì)姜黃素腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)量(Q)的變化,探討姜黃素腸吸收機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:濃度為5、10、20μg/ml時(shí)的姜黃素溶液的單位面積累積轉(zhuǎn)運(yùn)量分別為0.35±0.04μg/cm2、0.32±0.08g/cm2、0.25±0.0μg/ml。隨著姜黃素濃度的升高,在回腸段的轉(zhuǎn)運(yùn)量反而下降,有主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的特征

5、存在。在濃度為5μg/ml的姜黃素腸液中加入維拉帕米,單位面積累積轉(zhuǎn)運(yùn)量為0.41±0.07μg/ml。結(jié)論:對(duì)P-gp的抑制可減弱其對(duì)姜黃素的外排作用,從而增加了姜黃素的轉(zhuǎn)運(yùn)量。
　　 4.通過建立Caco-2細(xì)胞模型進(jìn)一步研究P-gp在姜黃素腸吸收過程中的作用。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定表觀滲透系數(shù)Papp和外排率ER等指標(biāo),觀察姜黃素在Caco-2細(xì)胞模型上轉(zhuǎn)運(yùn)規(guī)律。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著姜黃素的濃度升高,ER值逐漸升高,具有濃度依賴性;

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:10μg/ml及20μg/ml的ER值都大于1。外排比較明顯。加入500μM維拉帕米時(shí),10μg/ml及20μg/mlPappA→B比單用姜黃素時(shí)有所增加,跨細(xì)胞膜電阻并無顯著性的降低;可能是維拉帕米抑制了P-gp的外排作用。由本實(shí)驗(yàn)可知姜黃素的腸吸收機(jī)制極有可能和P-gp相關(guān)。
　　 5.研究“足三里”針刺穴位處方對(duì)姜黃素腸吸收的作用及其回腸P-gp表達(dá)的影響。方法:建立單用姜黃素(混懸液)、維拉帕米結(jié)合姜黃素和三種

7、常用“足三里”針刺處方組大鼠針灸干預(yù)實(shí)驗(yàn)。采用HPLC法檢測(cè)2h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度的變化,及免疫組化方法觀察各組大鼠回腸段P-gp的表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步顯示維拉帕米結(jié)合姜黃素用藥、針刺“足三里”穴位處方組都可以提高各時(shí)間姜黃素的血藥濃度值。維拉帕米結(jié)合姜黃素給藥組和“足三里”針刺處方各組姜黃素在大鼠胃腸道的吸收均優(yōu)于姜黃素單獨(dú)用藥組。免疫組化結(jié)果顯示:單用姜黃素給藥組的P-gp平均光密度值表達(dá)比姜黃素結(jié)合維拉帕米給藥組、針刺“足三