姜黃素類化合物對鎘染毒大鼠肝損傷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：姜黃素類化合物（Curs）主要成分為姜黃素（CurⅠ）、去甲氧基姜黃素（CurⅡ）和雙去甲氧基姜黃素（CurⅢ），實(shí)驗(yàn)通過對姜黃的提取，得到姜黃素類化合物的最佳提取溶劑，再對姜黃素類化合物（Curs）通過柱層析進(jìn)行分離，得到分離三種單體的最佳柱層析條件；目前研究中認(rèn)為鎘對機(jī)體的毒性主要是氧化損傷，姜黃素類化合物也被證實(shí)具有抗氧化活性，本實(shí)驗(yàn)研究的目的在于對其體外的抗氧化活性進(jìn)行比較，從抗氧化的角度在分子水平和細(xì)胞水平研究姜黃素類化

2、合物單體對鎘染毒大鼠肝臟損傷的干預(yù)作用，為姜黃素類化合物在臨床和職業(yè)鎘中毒的防治及作用機(jī)制提供初步的理論依據(jù)。
　　方法：1、姜黃素類化合物的分離純化：以水、50％乙醇、70%乙醇、80%乙醇、無水乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸乙酯：乙醇（1：1）9種常用提取溶劑對中藥姜黃在相同條件下提取，采用高效液相色譜法（HPLC）測定提取液中姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素的含量，分析確定最佳提取溶劑；考察柱層析條件，包括：洗脫劑

3、、填裝材料、填裝量以及上樣量，以得到三種單體的最佳分離條件。2、體外抗氧化實(shí)驗(yàn)：DPPH法檢測姜黃素和雙去甲氧基姜黃素的抗氧化活性并比較活性大小。3、大鼠鎘染毒干預(yù)實(shí)驗(yàn)：大鼠36只，隨機(jī)分為對照組，染鎘組，姜黃素低劑量（25 mg/kg）組，姜黃素高劑量（50 mg/kg）組，雙去甲氧基姜黃素低劑量（25 mg/kg）組，雙去甲氧基姜黃素高劑量（50 mg/kg）組。以2.0 mg/kg劑量腹腔注射氯化鎘（CdCl2），6次，隔天染，共

4、12天；染鎘的同時(shí)灌胃給藥，連續(xù)給藥6周。檢測大鼠肝組織谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）水平及丙二醛（MDA）含量，蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察肝組織病理切片，SPSS17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，描述采用（(x)±s），P＜0.05表明結(jié)果有顯著差異。比較姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對鎘染毒大鼠肝損傷的干預(yù)作用。
　　結(jié)果：1、提取實(shí)驗(yàn)顯示甲醇對姜黃素類化合物的

5、提取率高于其他溶劑，但從經(jīng)濟(jì)和安全角度考慮，選擇70%乙醇為提取溶劑；優(yōu)化得到最佳分離條件為，以硅膠按柱徑高比1：8干法裝柱，以樣品：填裝1：120濕法上樣，氯仿：甲酸（100：0.7）、氯仿：甲醇：甲酸（99：1：0.7）和（98：2：0.7）為洗脫劑梯度洗脫，分離得到純度較高的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素。2、氧化活性比較中，姜黃素對DPPH的清除率遠(yuǎn)高于雙去甲氧基姜黃素。3鎘染毒實(shí)驗(yàn)中，染鎘組大鼠AST、ALT、Cas

6、pase-3水平及MDA含量均顯著升高，SOD水平明顯降低，與對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），給藥組AST、ALT、Caspase-3水平及MDA含量較染鎘組降低，SOD水平升高；病理切片顯示染鎘組大鼠肝組織細(xì)胞大量壞死和凋亡，與給藥組相比細(xì)胞結(jié)構(gòu)較染鎘組完整，姜黃素高劑量組細(xì)胞形態(tài)與對照組接近。
　　結(jié)論：以70%乙醇提取姜黃素類化合物，優(yōu)化得到柱層析的最佳條件分離得到單體。大鼠鎘染毒干預(yù)實(shí)驗(yàn)表明姜黃素和雙去甲氧基姜黃素