中國特有柚類資源黃酮含量變化及抗氧化活性研究.pdf

1、中國是世界柑橘的主要起源地之一，品種資源豐富，近二十年來，我國柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，2010年全國栽培柑橘面積221.2萬公頃，產(chǎn)量2645萬噸，無論是面積還是產(chǎn)量均居世界第一。柑橘類水果不僅營養(yǎng)成分豐富，而且富含類黃酮等多種活性成分，是提取和生產(chǎn)植物源生物活性物質(zhì)的重要來源之一。柚原產(chǎn)我國，自然雜種及選育品種眾多，柚果實中含有豐富的生物活性物質(zhì)如酚酸、類黃酮等，其中類黃酮具有重要生物活性及保健功能。有關(guān)柑桔類黃酮的檢測分析、活性評價和利用

2、已成為目前研究的熱點，但對我國特有柚類及柚雜種資源類黃酮的系統(tǒng)研究還未見報道。利用現(xiàn)代儀器分析和體外抗氧化測定技術(shù)，系統(tǒng)對我國特有柚類果實的類黃酮種類及含量進行測定分析，并探討其抗氧化活性與類黃酮等組分之間的相關(guān)性，這對建立我國柚類資源類黃酮數(shù)據(jù)庫，篩選富含類黃酮的我國柑橘資源品種，促進我國特有柑橘資源的綜合開發(fā)利用都具有一定的指導(dǎo)意義。
　　 本研究選擇國家柑橘種質(zhì)資源圃（重慶）的32個柚、葡萄柚品種以及2個柚雜種不同成熟期的

3、果實為對象，優(yōu)化建立了快速檢測柑橘類黃酮的超高效液相色譜(UPLC)方法，對其果實中的類黃酮種類及含量、果實提取物的抗氧化活性以及果實的理化品質(zhì)進行了分析，探討了不同種類、不同成熟期、不同果實部位的類黃酮分布規(guī)律及果實提取物的抗氧化活性，初步分析了類黃酮遺傳機制及類黃酮與果實品質(zhì)、柑橘品種之間的相互關(guān)系。具體研究結(jié)果如下:
　　 (1)建立了一種分析測試柑橘果實中類黃酮的超高效液相色譜法，能在11min內(nèi)分離測定柑橘果皮及果肉中

4、的11種類黃酮。具體技術(shù)參數(shù)如下:色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18分析柱（2.1 mm×100 mm，1.7μm）;流動相:0.1％乙酸水溶液(A)和甲醇(B)，采用梯度洗脫，洗脫程序為:(1)0-5 min，90％-80％ A;(2)5-10 min,80％-30％ A;(3)10-15 min,30％-20％ A;(4)15-16 min，20％-90％ A;柱溫:35℃;流速:0.3 mL·min-1。11種類黃酮

5、在11分鐘內(nèi)得到完全分離，各峰之間分離度R在1.80-7.02之間，各類黃酮的檢出限在0.05-0.13μg/mL，定量限在0.08-0.35μg·mL-1，RSD在0.89％-5.93％，回收率居于85.4％-114.0％。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、有機溶劑用量少。
　　 (2)分析了國家柑橘種質(zhì)資源圃的32個柚及葡萄柚、2個柚雜種果實不同成熟期的類黃酮種類和含量。結(jié)果表明:柚類果實中類黃酮含量豐富，各品種果實果皮中的類黃酮

6、含量都顯著高于果肉，未成熟期類黃酮含量高于成熟期。在柚果實中以累積柚皮苷、蕓香柚皮苷、圣草枸櫞苷、新橙皮苷、柚皮素5種類黃酮為主，葡萄柚果實中以柚皮苷、新橙皮苷、蕓香柚皮苷、圣草枸櫞苷、橙皮苷、香風(fēng)草苷、柚皮素、橙皮素、川皮苷、橘黃酮10種類黃酮為主。瑞紅果實果皮、果肉中柚皮苷含量最高，未成熟期果皮為23377.61 mg/kg，成熟期果皮為9871.69mg/kg，果肉為4166.19 mg/kg;新橙皮苷在未成熟期含量最高為雞尾果皮

7、(12828.41mg/kg)，成熟期果皮含量最高為雞尾（7011.15 mg/kg）果肉含量最高為常山胡柚(3121.72mg/kg)。華鎣山柚為普通柚里所含類黃酮種類數(shù)量最多的一種，在未成熟果中含11種中的9種。雜種枳殼×沙田柚類果實共檢測到9種類黃酮，其中以蕓香柚皮苷含量最高，分別為果皮(9020mg/kg)、果肉(1240mg/kg);墊江白柚×沙田柚的類黃酮累積規(guī)律與柚類相似，說明雜種后代的類黃酮含量可能受其親本尤其是父本影響

8、較大。
　　 (3)分析了32個品種不同成熟期果實的抗氧化活性，評價方法分別為DPPH法、ABTS法及Fenton反應(yīng)法。3種評價方法中以清除ABTS·自由基的能力最強。未成熟期果皮的抗氧化活性略高于成熟期果皮;成熟期果皮抗氧化活性高于果肉。32個品種均表現(xiàn)出較強的對DPPH·自由基的清除能力，在未成熟期，測定值在32.33～65.21 VCE/100 ml的范圍。果實成熟以后在31.93～55.53VCE/100 ml之間;對

9、ABTS·的清除能力，綜合未成熟期和成熟期考慮，為華鎣山柚為最高，分別為83.40％、82.51％;對·OH自由基的清除能力，結(jié)果顯示為三個葡萄柚品種測定值較高，綜合三種評價方法可得出，瑞紅、雞尾、常山胡柚、華鎣山柚的果皮提取物對三種自由基清除能力較強，抗氧化活性較高。
　　 (4)分析了32個柚及葡萄柚品種的總糖、還原糖、蔗糖、可滴定酸和維生素C，運用主成分分析法分析了各樣品的主成分分值。品質(zhì)分析的結(jié)果顯示，柚類果實與其他柑橘