肝癌細胞旁分泌作用對LX-2細胞增殖、膠原分泌的影響及機制的體外研究.pdf

1、目的：
　　研究肝癌細胞旁分泌作用對激活型肝星狀細胞LX-2增殖及膠原分泌的影響并初步探討其機制。
　　方法：
　　培養(yǎng)人肝癌細胞系HepG2，收集第3天的條件培養(yǎng)基，將其按照不同比例：5％、10%、20%、40%加入至人激活型肝星狀細胞系LX-2培養(yǎng)體系中進行培養(yǎng)；MTT比色法檢測LX-2細胞增殖率；倒置顯微鏡觀察LX-2細胞形態(tài)；Masson染色及天狼星紅染色對細胞內膠原進行觀察；檢測LX-2細胞培養(yǎng)基中羥脯氨酸含

2、量；免疫印跡法檢測相關蛋白表達；酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測條件培養(yǎng)基及LX-2細胞培養(yǎng)基中IL-6，TNF-α及TGF-β1分泌量。
　　結果：
　　(1)HepG2細胞條件培養(yǎng)基對LX-2細胞增殖能力的影響：隨著條件培養(yǎng)基比例的增加，各濃度組LX-2細胞增殖率逐漸升高，并隨時間逐漸增加，24h后40%條件培養(yǎng)基組LX-2細胞增殖率高于其他各組，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；48h后，20%組及40%組LX-2細胞增殖率與對照組

3、相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；72h后，20%組及40%組細胞增殖率與對照組、5%組及10%組相比組間均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；倒置顯微鏡下可見72h后，對照組LX-2細胞分布稀疏，20%組及40%組LX-2細胞生長密集，并呈復層生長；
　　(2)HepG2細胞條件培養(yǎng)基對LX-2細胞膠原合成及分泌的影響：Masson染色及天狼星紅染色結果顯示，加入不同比例條件培養(yǎng)基后，隨著條件培養(yǎng)基比例的增加，LX-2細胞胞質中膠

4、原著色增多；加入細胞條件培養(yǎng)基后LX-2細胞培養(yǎng)基中羥脯氨酸含量增高，呈時間及濃度依賴性（P＜0.05），24h后40%組羥脯氨酸含量與其他各組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），48h后20%組、40%組羥脯氨酸含量與其他各組相比均有組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），72h后條件培養(yǎng)基干預各組羥脯氨酸含量均高于對照組（P＜0.05），40%組羥脯氨酸含量與其他各組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），20%組羥脯氨酸含量與對照組、5

5、%組及10%組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；
　　(3)HepG2細胞條件培養(yǎng)基促進LX-2細胞增殖與膠原分泌的分子機制探討：肌成纖維細胞標志物Col-1和α-SMA的表達量在加入不同比例條件培養(yǎng)基后與對照組相比均出現上調（P＜0.05）；不同比例條件培養(yǎng)基處理組LX-2細胞的p-P38、p-AKT及BCL-2的表達水平與對照組相比上調，組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），P38、PI3K和BCL-2的表達在加入條件培養(yǎng)基后

6、呈上升趨勢，20%組及40%組與對照組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；加入不同比例HepG2條件培養(yǎng)基后，LX-2細胞TGF-β1、TNF-α的分泌量與對照組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），10%組、20%組、40%組IL-6分泌量與對照組相比組間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　?。?）人肝癌細胞HepG2旁分泌作用可促進人激活型肝星狀細胞LX-2增殖及膠原過度分泌；
　?。?）人肝癌細胞He