褐藻多糖硫酸酯對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖和凋亡的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、肝癌作為最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，被稱(chēng)為新世紀(jì)人類(lèi)健康的第一殺手，已成為當(dāng)今世界上六大常見(jiàn)癌癥之一。在我國(guó)，近年來(lái)肝癌患者的比例也在逐年加大。目前臨床常用的手術(shù)、化療和放療等治療方法均會(huì)引起骨髓抑制、免疫力低下等各種毒副反應(yīng)。此外，腫瘤細(xì)胞自身可以通過(guò)減少藥物攝入量和降低藥物的活性等方式產(chǎn)生抗藥性。因此，亟待我們尋找和研發(fā)毒性低、藥效高的新型抗腫瘤藥物。
　　海洋因其特有的生態(tài)環(huán)境，孕育出了紛繁的生物資源和多樣的生物物種，而這些海洋生

2、物體內(nèi)均含有化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特新穎、藥理活性高效多樣的天然化合物。褐藻多糖硫酸酯（英文名：Fucoidan）是海洋生物中特有的一種活性多糖，有諸多報(bào)道表明其擁有抗炎、抗腫瘤的功效，但是關(guān)于其在治療肝癌的機(jī)制方面的報(bào)道仍然比較少。據(jù)此，本文首先對(duì)褐藻多糖硫酸酯的抗癌功效進(jìn)行了檢測(cè)，然后在此基礎(chǔ)上對(duì)其抗癌機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)性的研究。主要研究結(jié)果如下：
　　1）Fucoidan能有效抑制人肝癌細(xì)胞增殖。不同濃度的Fucoidan作用于肝癌細(xì)胞He

3、pG2、正常肝細(xì)胞 L02以及肺腺癌細(xì)胞A549，24 h后MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：Fucoidan可以濃度依賴性的抑制肝癌細(xì)胞和肺腺癌細(xì)胞的增殖，卻不影響正常肝細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖過(guò)程。而且 Fucoidn對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用有差異，所以采用 Fucodian治癌癥時(shí)，需要結(jié)合癌癥類(lèi)型具體分析。
　　2） Fucoidan可以阻滯細(xì)胞周期的運(yùn)行并促進(jìn)其發(fā)生凋亡。幾種不同濃度的Fucoidan作用于肝癌HepG2細(xì)胞24 h后，通過(guò)PI染色

4、以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期變化的影響，發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加，停滯于G2/M期的細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，說(shuō)明Fuc ida n可以將肝癌細(xì)胞Hep G2阻滯在G2/M期；此外，采用4 mg/mL的Fucoidan處理HepG2細(xì)胞24 h后，Hoechst染色發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞呈現(xiàn)出與凋亡相關(guān)的形態(tài)學(xué)特征。進(jìn)一步采用Annexin V-FITC/PI雙染和流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)證實(shí)Fucoidan能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡，并表現(xiàn)出濃度依

5、賴性。
　　3）Fucoidan通過(guò)調(diào)節(jié)與細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)來(lái)達(dá)到抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的目的。RT-PCR結(jié)果顯示Fucoidan可以通過(guò)下調(diào)周期蛋白激酶CDK1和 CDK2的轉(zhuǎn)錄量，抑制周期蛋白的活化過(guò)程，從而阻止細(xì)胞周期的正常運(yùn)行，進(jìn)而抑制了細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程。此外，F(xiàn)ucoidan還可以通過(guò)抑制抗凋亡基因Bcl-2的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)活化促凋亡基因Bax、p53的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)肝癌HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡。Western b