馬尾松花粉多糖的結(jié)構(gòu)分析以及硫酸酯化多糖對肝癌細胞 HepG2的影響.pdf

1、許多研究表明，多糖作為一類重要的生物活性大分子，具有多種功能活性，例如抗氧化，抗腫瘤，降血糖以及提高機體免疫力等。對多糖進行特定的修飾，可以極大提高多糖的生物學(xué)活性。本實驗室的前期工作已經(jīng)證明，硫酸化馬尾松花粉多糖SPPM60可以顯著抑制肝癌細胞HepG2的增殖，而未硫酸化的多糖PPM60則對HepG2的增殖無顯著性影響。此外，SPPM60可以顯著降低HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度，而PPM60則對[Ca2+] i無顯著性影響。大量實驗表明，

2、用適當(dāng)?shù)姆椒▽Χ嗵沁M行降解，可以提高多糖的生物活性。目前，鮮有對馬尾松花粉多的降解以及降解后多糖構(gòu)效關(guān)系等方面的研究。因此本實驗在結(jié)合實驗室前期工作的基礎(chǔ)上，對馬尾松花粉多糖組分進行降解，并通過細胞學(xué)實驗和NMR技術(shù)探究降解后多糖與未降解時相比構(gòu)效關(guān)系的不同。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用水煮醇沉法從破壁馬尾松花粉中提取多糖，并采用三氯乙酸法除去雜蛋白，用 TOYOPEARL HW-65S中壓凝膠柱層析對80％乙醇沉淀的多糖進行

3、分離純化，多次重復(fù)得到較為均一多糖組分，將其命名為PPM80-B。采用高效凝膠色譜法對多糖組分PPM80-B進行相對分子量的測定，結(jié)果測得PPM80-B的相對分子量為317.8K。⑵采用酸解法對松花粉多糖PPM80-B進行降解，得到降解后的低分子量多糖組分，命名為DPPM80-B。在與實驗一相同的色譜條件下對DPPM80-B進行相對分子量的測定，測得其分子量為3.131K，表明降解是成功的。采用氯磺酸-吡啶法分別對PPM80-B和DPP

4、M80-B進行硫酸酯化修飾，得到酯化后多糖，并分別命名為SPPM80-B和 DSPPM80-B。采用氯化鋇-明膠比濁法分別對SPPM80-B和 DSPPM80-B進行硫酸根取代度的測定，結(jié)果測得兩者的取代度分別為1.08和1.26。⑶MTT法分別探究四種多糖（PPM80、SPPM80、DPPM80和DSPPM80)對肝癌細胞HepG2增殖的影響。實驗結(jié)果表明，SPPM80和DSPPM80對 HepG2 的增殖具有抑制作用，且具

5、有時間和劑量依賴性。 SPPM80對HepG2增殖的抑制作用要強于DSPPM80。200昭/m L作用72h SPPM80對HepG2的抑制率達到31.47%，而相同條件下DSPPM80對 HepG2的抑制率則為15.38%。PPM80和DPPM80對HepG2的增殖沒有顯著地影響。⑷應(yīng)用fura-2探針采用雙波長熒光法測定四種多糖（PPM80、SPPM80、DPPM80和DSPPM80)對肝癌細胞HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。實驗結(jié)

6、果表明，SPPM80和DSPPM80可以降低HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度，且 SPPM80的作用效果更加顯著。PPM80和DPPM80對HepG2胞內(nèi)鈣離子濃度沒有顯著地影響。⑸采用核磁共振波譜法對松花粉多糖的結(jié)構(gòu)進行解析，主要從iHNMR(氫譜）和13CNMR(碳譜）兩方面進行考察。結(jié)果顯示，構(gòu)成該多糖的單糖以吡喃環(huán)的形式存在，且該多糖是一種中性多糖，不含G a lN殘基，可能含有乙酰基中甲基氫或氨基糖中于N-乙酰氨基中的甲基氫，有C-6