油松花粉多糖分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、油松花粉多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等功能。課題以華北承德地區(qū)的油松花粉為原料，對其中的花粉活性多糖的提取工藝進(jìn)行研究；苯酚-硫酸法測定花粉多糖含量的顯色條件進(jìn)行優(yōu)化；采用DEAE-纖維素52柱層析、Sephacryl S-200凝膠柱層析對花粉多糖進(jìn)行分離和純化；運(yùn)用Sephacryl S-300凝膠柱層析進(jìn)行純度鑒定；運(yùn)用紅外光譜分析、紫外掃描分析對花粉多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步研究；通過體外清除超氧陰離子自由基和羥基自由基研究油松花粉多糖的抗

2、氧化活性。主要的研究結(jié)果如下：
　　 (1)以葡萄糖為對照，優(yōu)選苯酚-硫酸法測定油松花粉多糖含量的顯色條件。最佳顯色條件為：取待測油松花粉多糖2mL，加入濃度為5％苯酚1mL，迅速滴加濃硫酸6.0mL，.搖勻后于沸水浴中放置10min，在483nm處測定吸光度值。
　　 (2)對油松花粉的水提工藝進(jìn)行了研究，探討提取溫度、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)對多糖提取率的影響。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝條件

3、。結(jié)果表明浸提溫度對多糖提取率的影響最大，其次為料液比、提取次數(shù)，浸提時(shí)間的影響最小。油松花粉多糖的最佳提取工藝條件為：提取溫度為70℃，料液比為1:12，提取時(shí)間為2h，提取次數(shù)為3次。在此提取條件下，松花粉多糖的得率為1.81％。
　　 (3)用DEAE-纖維素52對油松花粉精制多糖進(jìn)行初步分離，主要得到D1和D3兩個(gè)組分。再用Sephaeryl S-200凝膠柱色譜分別對多糖D1和D3進(jìn)一步分離純化得到兩種均一組分D11和

4、D31。經(jīng)過Sephaeryl S-300凝膠柱色譜進(jìn)行純度鑒定，表明D11和D31是均一多糖。采用用凝膠過濾法測定D11分子量為76468。UV檢測顯示油松花粉多糖D11于280nm處未見有核酸和蛋白特征吸收峰，經(jīng)IR檢測證實(shí)多糖D11具有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰。
　　 (4)油松花粉多糖粗多糖、精制多糖對O2-·自由基和·OH自由基均有一定的清除作用，并且隨著多糖濃度的增大清除效果增強(qiáng)。油松花粉精制多糖的作用效果大于油松花粉