條斑紫菜多糖分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、條斑紫菜(Porphyrayezoensis))具有較高的食用和藥用價值，大量研究已表明紫菜多糖具有降血脂、抗凝血、抗腫瘤、抗輻射、抗疲勞、抗氧化、增強免疫力等多種生物學活性。本研究主要應用超濾膜技術，采用4種不同截留分子量(MWCO)的超濾膜對條斑紫菜多糖（Porphyrayezoensis Polysaccharide，PP）進行分離純化，得到分子量為PPⅠ（MW≥100,000）、PPⅡ（MW：50,000-100,000）、PP

2、Ⅲ（MW：10,000-50,000）、PPⅣ（MW：5,000-10,000）和PPⅤ（MW≤5,000）的多糖，對5種不同分子量的多糖進行體外抗氧化活性研究。進一步對體外抗氧化活性較高的多糖組分PPⅣ和PPⅤ進行結構鑒定及體內抗氧化活性研究，以期探討紫菜多糖結構與其生物活性之間的構效關系，為條斑紫菜多糖活性成分開發(fā)利用提供一種新方法。
　　本文以條斑紫菜為原料，微波輔助萃取技術提取多糖，在單因素實驗的基礎上，采用響應面設計方法

3、研究多糖提取的最優(yōu)工藝條件。選取液料比、pH、微波輔助處理時間、水浴溫度進行優(yōu)化分析，以確定條斑紫菜多糖的最佳提取條件。響應面研究結果表明微波輔助提取條斑紫菜多糖的較優(yōu)工藝條件為：液料比60mL/g，水提液pH8.0，微波輔助處理時間9min，水浴溫度100℃。在此條件下條斑紫菜多糖的提取率為12.73％±0.09%(n=5)，與模型預測值非常接近。
　　對不同分子量的條斑紫菜多糖進行體外抗氧化活性研究。結果表明，在實驗濃度范圍內

4、，不同分子量的多糖在不同的濃度下都具有較強的抗氧化能力，對羥自由基（·OH）、超氧陰離子（·O2-）、DPPH·自由基都具有較好的清除能力，自由基清除率與多糖濃度呈現量效關系，均隨濃度的增加而增大；抗氧化能力與其相對分子質量大小相關，分子量較小的PPⅣ和PPⅤ抗氧化能力較強，明顯高于分子量較大的PPⅠ。超濾能夠實現不同分子量PP的良好分離，可作為條斑紫菜多糖活性成分開發(fā)利用的一種新方法。
　　SOD、GSH-Px、CAT是機體內廣

5、泛存在的幾種重要的抗氧化酶，他們能有效清除氧自由基，保護生物體細胞避免氧化損傷。MDA是生物膜脂質過氧化的降解產物，是反映過氧化損傷的常用指標，MDA含量增高會引起細胞損傷?？寡趸瘎┛梢蕴岣唧w內抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)的活性，清除體內自由基和脂質過氧化物，從而有效地防止或減輕體內自由基所導致的氧化損傷，增強機體免疫能力，延緩衰老。
　　不同分子量條斑紫菜多糖體內抗氧化活性分析：實驗結果表明，衰老模型組小鼠在連續(xù)注射

6、D-半乳糖60d后，肝臟組織、腦組織和血液中SOD、GSH-Px、CAT活性均顯著下降，MDA含量顯著升高,說明本實驗中的衰老模型建立成功。PPⅣ和PPⅤ的中劑量組和高劑量均組能不同程度顯著提高肝臟組織、腦組織和血液中SOD活力、GSH-Px活力和CAT活力，顯著降低MDA含量，表現出較強的抗氧化作用，表明條斑紫菜多糖具有較好的抗氧化作用，值得進一步研究與開發(fā)。
　　柱層析法分離純化條斑紫菜多糖。采用超濾膜法分離出的PPⅣ和PPⅤ

7、多糖提取液，除蛋白后，減壓濃縮，95%乙醇沉淀，冷凍干燥得到PPⅣ和PPⅤ粗多糖。粗多糖經DEAE-52陰離子交換層析柱獲得四種帶有不同電荷性質的多糖PPⅣ-D1、PPⅣ-D2、PPⅤ-D1和PPⅤ-D2，葡聚糖凝膠G-100層析柱對這四種多糖進一步純化，各組分洗脫峰峰型狹窄對稱，分離效果較好，最后冷凍干燥獲得四個條斑紫菜多糖純品PPⅣ-G1、 PPⅣ-G2、PPⅤ-G1和PPⅤ-G2。
　　采用紅外光譜測定儀，氣相色譜質譜聯用儀

8、，核磁共振光譜分析儀對多糖純品PPⅣ-G1、 PPⅣ-G2、PPⅤ-G1和PPⅤ-G2進行進行結構鑒定。紅外光譜分析表明四種純品均具有多糖的特征吸收峰；PPⅣ和PPⅤ組分中均主要由3,6-內醚半乳糖組成，含有硫酸基，不含糖醛酸；四個多糖純品中可能含有葡萄吡喃糖殘基。將多糖 PPⅣG-1、PPⅣG-2、PPⅤG-1、PPⅤG-2還原水解為單糖，乙?；筮M行GC分析，根據各單糖色譜峰與標準品的保留時間對照，PPⅣG-1、PPⅣG-2和PPⅤ