條斑紫菜多糖結(jié)構(gòu)鑒定及抗疲勞活性研究.pdf

1、條斑紫菜(Porphyra yezoensis)具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，大量資料已表明紫菜多糖具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗凝血、降血脂、抗氧化等多種生物學(xué)活性。本論文主要應(yīng)用生化技術(shù)對條斑紫菜多糖進(jìn)行了分離純化，從中獲得一種條斑紫菜多糖純品PY-G1，并對其一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測分析，同時(shí)對提取純化的條斑紫菜多糖進(jìn)行了抗疲勞生物活性研究。 條斑紫菜多糖分離純化。采用熱水法制備條斑紫菜多糖提取液，經(jīng)Sevag法脫蛋白和95％乙醇沉淀，

2、最后冷凍干燥得到條斑紫菜粗多糖。條斑紫菜粗多糖經(jīng)DEAE-52柱層析純化獲得2個(gè)具有不同電荷性質(zhì)的多糖組分PY-D1和PY-D2，用高效液相法測定其分子量分布后，選用合適分子篩凝膠柱層析Sepharose CL-6B純化，最后獲得2個(gè)條斑紫菜多糖產(chǎn)品PY-G1和PY-G2，均為首次從該藻類中分離得到。高效液相法、旋光度法、紫外光度法檢測結(jié)果表明PY-G1為均一多糖。 條斑紫菜多糖純品PY-G1結(jié)構(gòu)分析。采用了高碘酸氧化法、還原水

3、解法、明膠比濁法、甲基化分析法、脫硫酸基分析等化學(xué)方法和高效液相法(HPLC)、氣相色譜(GC)分析、質(zhì)譜(MS)分析、紅外光譜測定、NMR光譜分析等光譜學(xué)方法，對條斑紫菜多糖成分PY-G1進(jìn)行了純度及結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果表明：條斑紫菜多糖PY-G1樣品分子量為246kDa，硫酸基百分含量為9％，為半乳聚糖，多糖鏈中存在1，3和1，4交替相連的重復(fù)單元，部分1，4連接的半乳糖殘基6位上含有硫酸基，另一部分1，4連接的半乳糖殘基3位和6位上含有

4、內(nèi)醚環(huán)。由還原水解法得到PY-G1主要由一種單糖，即半乳糖(92％)組成的，但另外含有具有取代基的3，6-內(nèi)醚半乳糖(3％)和6-甲基半乳糖(5％)。由高碘酸氧化結(jié)果計(jì)算得平均每mol單糖殘基消耗的高碘酸納量為0.51mol，說明多糖的骨架主要是以1→3位連接的半乳糖，或1→4位連接的3，6-內(nèi)醚-半乳糖組成，其摩爾比約為1：1。根據(jù)已有文獻(xiàn)對PY-G1的紅外圖譜、13C-NMR、1H-NMR、GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬。根據(jù)以上結(jié)果可推

5、斷：PY-G1主要由含硫酸基的前體[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-6-OSO3-α-L-半乳糖]組成，同時(shí)還存在瓊膠二糖[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-3，6-內(nèi)醚-2-OCH3-α-L-半乳糖]及[(1→3)-β-D-半乳糖-(1→4)-α-L-半乳糖]的重復(fù)單元，其比例約為9：9：1。此外1，4連接的半乳糖殘基的2位和1，3連接的半乳糖殘基6位上尚含有天然的甲氧基。 條斑紫菜多糖抗疲勞生物學(xué)活性研究。應(yīng)用

6、活體動物實(shí)驗(yàn)技術(shù)，通過紫菜多糖不同劑量(0，0.75 positive control，0.125，0.25，2.5，25mg/kg/d)對小鼠游泳時(shí)間、乳酸脫氫酶活性、肌糖原和肝糖原含量等指標(biāo)的檢測，分析了紫菜多糖提高小鼠抗疲勞生物活性功能及其量效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫菜多糖可顯著延長小鼠游泳時(shí)間，最高可以提高37％；并且可以使小鼠在游泳前后乳酸脫氫酶含量分別增加53.5％和42.5％(P<0.05)；增加小鼠肌糖原儲備量和肝糖原儲備