人類SCDR10B、LHFPL1和CYPJ基因的克隆及其編碼蛋白的特征與功能研究.pdf

1、由于生物基因組進化中的保守性,具有某一功能的基因在不同物種之間常具有一定的同源性.這種同源性對新基因的克隆和功能研究具有指導作用.利用這種基因間的同源性,有目的的克隆基因家族新成員,已經(jīng)成為新基因克隆的有效策略.該論文分為三個部分,第一和第二部分利用同源策略,克隆到新的短鏈脫氫酶/還原酶基因SCDR10B和脂肪瘤HMGIC融合伴侶類基因LHFPL1,對其功能進行了初步研究,第三部分對脯氨酸異構(gòu)酶CyclophilinJ的生化特性和結(jié)構(gòu)進

2、行了研究.短鏈脫氫酶/還原酶(Short-chain Dehydrogenases/Reductases,SDR)家族是一個由很多成員組成的大家族,其中大部分是NAD<'+>或NADP<'+>依賴的氧化還原酶.在該論文第一部分中,我們通過同源篩選的策略,用11β-HSD1為信息探針,拼接并從人腦組織cDNA文庫中克隆到新基因SCDR10B.該基因編碼的蛋白質(zhì)具有保守的短鏈脫氫酶/還原酶結(jié)構(gòu)域,氨基酸序列比較顯示這個新的推導蛋白與11β-

3、HSD1有較高的同源性和結(jié)構(gòu)相似性,氨基酸序列的一致性為43﹪,可能是羥類固醇脫氫酶這個亞家族的新成員.在原核表達系統(tǒng)中對SCDR10B基因進行了重組表達,重組蛋白免疫兔獲得了其多克隆抗體.脂肪瘤為脂肪組織的良性腫瘤,是人類最常見的起源于間葉組織的腫瘤之一.這些腫瘤在細胞遺傳學上的特征是染色體畸變,其中有2/3的病例在染色體12q13-15區(qū)域出現(xiàn)染色體易位,12q13-15區(qū)域的畸變通常會影響到高速泳動蛋白基因HMGIC,目前,在有染

4、色體畸變t(12;13)的脂肪瘤患者中,鑒別出了一個HMGIC易位伴侶基因LHFP(lipoma HMGIC fusion partner).在該論文第二部分中,我們以LHFP作為信息探針,克隆到了新基因LHFPL1,該基因定位于染色體Xq23.人17種組織中的表達譜分析顯示,LHFPL1基因呈廣譜表達,其中肺,胸腺,骨骼肌,結(jié)腸,卵巢表達豐度高.RT-PCR檢測結(jié)果顯示LHFPL1基因在肝腫瘤細胞中呈低水平表達.LHFPL1蛋白含有N

5、端信號肽以及三個跨膜結(jié)構(gòu),被預測定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),通過細胞免疫熒光定位實驗得到證實,可推測LHFPL1基因在生物體內(nèi)可能通過其所表達的分泌型的跨膜蛋白行使其功能.此外LHFPL1與LHFP高度同源,今后的研究中可以探討LHFPL1基因在腫瘤發(fā)病中是否象LHFP基因那樣通過基因融和起作用.人類Cyclophilins是一類在進化上高度保守且具有肽酰脯氨酰順反異構(gòu)酶活性的蛋白,這類蛋白廣泛存在于各種組織,其酶活性通常能被CSA抑制.近來的研究還

6、表明,cyclophilin家族的成員除了上述脯氨酸異夠構(gòu)酶活性之外,還具有核酸酶活性,能降解DNA,這種核酸酶活性與凋亡核酸酶比較有許多相似之處,目前認為cyclophilin在細胞凋亡過程中可能起降解染色體DNA的作用.在該論文第三部分中,我們對該實驗室克隆的cyclophilins家族的新成員CYPJ的生化特性和結(jié)構(gòu)進行了研究.體外重組表達純化獲得高純度CYPJ蛋白也具有脯氨酸異構(gòu)酶活性.它是否也具有核酸酶活性呢?我們對該問題進行