人類鋅指蛋白家族新基因ZNF641和突觸小泡蛋白類似新基因hSVOP的克隆與功能研究.pdf

1、　　轉(zhuǎn)錄因子在多種細胞功能中擔任了重要角色，包括細胞生長、增殖、調(diào)亡和細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導。人們已經(jīng)鑒定了幾個大的轉(zhuǎn)錄因子家族。在哺乳動物中，鋅指蛋白是最龐大的家族。研究表明，鋅指因子能調(diào)節(jié)多種在心臟表達的基因。為了研究與心臟發(fā)育和心臟疾病相關(guān)的基因，本文從人類胚胎心臟cDNA文庫中分離并鑒定了一個新的鋅指基因，經(jīng)國際基因命名委員會批準命名為ZNF641。ZNF641定位在染色體12q13.11區(qū)帶，含一個KRAB-A框和5個C2H2型鋅指

2、。其cDNA全長4906個堿基，含一個1317堿基的開放閱讀框，編碼一個由438個氨基酸組成，分子量為49.5kDa的蛋白。Northern雜交分析表明ZNF641在成人組織中廣泛表達，其中，在骨骼肌組織有高度表達，在心臟、肝臟和胰腺中有中度表達，在大腦，腎臟和肺中沒有表達。通過構(gòu)建增強型綠色熒光蛋白與ZNF641融合基因的真核表達載體，轉(zhuǎn)染COS-7細胞系，瞬時表達后用熒光顯微鏡觀察ZNF641融合蛋白的活細胞定位及表達，證明ZNF6

3、41蛋白在細胞核和細胞質(zhì)中均有表達。報告基因分析證明ZNF641是一個轉(zhuǎn)錄激活因子，結(jié)構(gòu)域分段分析表明ZNF641的KRAB-A框和C2H2鋅指之間的連接部分(linker)是其轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵序列，可能是一個新的轉(zhuǎn)錄激活子。ZNF641在COS-7細胞中過表達能激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1與SRE的活性，這兩種因子是MAPK信號途徑介導的重要因子，說明ZNF641蛋白可能在MAPK信號途徑中作為激活因子介導細胞功能。綜合該基因的結(jié)構(gòu)和表達特征，

4、本文初步得出結(jié)論認為：ZNF641是參與多種人類胚胎器官發(fā)生的鋅指轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。此外本文還從人類cDNA文庫中分離并鑒定了一個人類突觸小泡類似新基因，經(jīng)國際基因命名委員會批準命名為hSVOP。它類似于突觸小泡蛋白SV2和SVOP，其cDNA序列全長為3556個堿基，開放閱讀框長1646個堿基，編碼548氨基酸的蛋白質(zhì)。該基因定位在第12號染色體12q24.12區(qū)段。生物信息學分析表明其蛋白質(zhì)包含12個跨膜結(jié)構(gòu)域，是典型的跨膜轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)。