恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物抵御宿主免疫清除作用研究.pdf

1、肺結(jié)核病是一種古老的疾病，是由肺結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病。肺結(jié)核分枝桿菌可潛伏性、持續(xù)性傳播，不易被免疫系統(tǒng)識(shí)別，并具有高耐藥特性。肺結(jié)核分枝桿菌為胞內(nèi)菌，能夠躲避免疫系統(tǒng)攻擊殺傷，從而可以長(zhǎng)時(shí)間在宿主體內(nèi)潛伏生存。當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能下降時(shí)，潛伏在宿主細(xì)胞內(nèi)的肺結(jié)核分枝桿菌大量爆發(fā)，繼而引起嚴(yán)重的肺部炎性疾病，影響人類的健康。研究肺結(jié)核分枝桿菌侵染宿主后躲避免疫系統(tǒng)攻擊的機(jī)制，對(duì)于闡明肺結(jié)核病發(fā)病機(jī)制及研發(fā)新型抗肺結(jié)核藥物具

2、有重大意義。為了解析肺結(jié)核分枝桿菌的免疫逃避機(jī)制，本論文以恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物（whole cell lysis，WCL）為研究對(duì)象，研究全裂解物與宿主免疫系統(tǒng)早期相互作用的免疫學(xué)特征指標(biāo)，為后續(xù)逐級(jí)分析全裂解物的免疫效應(yīng)成分，最終確定免疫效應(yīng)分子奠定基礎(chǔ)。
　　目的：探究恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物對(duì)細(xì)菌在宿主肺部清除速率的影響及對(duì)宿主早期免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用模式的探究。
　　方法：本論文通過(guò)氣溶膠發(fā)生方法優(yōu)化小鼠模型，模擬肺

3、結(jié)核分枝桿菌通過(guò)呼吸系統(tǒng)感染人體的過(guò)程。利用與肺結(jié)核分枝桿菌具有高度相似性并且無(wú)致病性的恥垢分枝桿菌作為模擬菌，將容易被機(jī)體快速識(shí)別并全部清除的非致病性的大腸桿菌作為對(duì)照細(xì)菌，比較大腸桿菌與恥垢分枝桿菌兩種細(xì)菌在小鼠肺部清除速率的差異；用恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后，研究其在宿主體內(nèi)清除速率的改變及宿主免疫系統(tǒng)應(yīng)答方式的改變；對(duì)比恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物和大腸桿菌細(xì)胞全裂解物單獨(dú)作用于宿主所產(chǎn)生的免疫系統(tǒng)應(yīng)答方式的改變，進(jìn)一步

4、驗(yàn)證恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的特殊作用模式。通過(guò)細(xì)菌計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)（CFU）計(jì)算對(duì)比細(xì)菌在體內(nèi)清除速率及差異，小鼠肺組織切片HE染色研究免疫病理學(xué)改變，酶聯(lián)吸附免疫測(cè)定(ELISA)檢測(cè)小鼠肺部免疫因子IFN-γ和 IL-10的表達(dá)，細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)(CBA)檢測(cè)小鼠體液免疫因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF、IFN-γ的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）恥垢分枝桿菌在小鼠肺部的清除速率低于大腸桿菌

5、；在14h時(shí)大腸桿菌清除完畢，恥垢分枝桿菌尚未完全清除，因此14h為差異最明顯階段，所以以取樣到14h作為早期免疫反應(yīng)研究的基礎(chǔ)；用恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后，大腸桿菌在宿主體內(nèi)的清除速率降低，恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)后的大腸桿菌14h時(shí)在體內(nèi)尚未清除完畢。
　　（2）HE染色免疫病理學(xué)結(jié)果顯示大腸桿菌組引起免疫細(xì)胞聚集程度大于恥垢分枝桿菌組及恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)后的大腸桿菌組，差異顯著（P＜0.05）；大

6、腸桿菌細(xì)胞全裂解物引起免疫細(xì)胞聚集程度亦大于恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物組，兩者差異極顯著（P＜0.01）。
　?。?）ELISA檢測(cè)恥垢分枝桿菌感染小鼠肺部后，肺部屬促炎因子的IFN-γ分泌低于大腸桿菌感染組，而與IFN-γ相互拮抗的抑炎因子IL-10分泌高于大腸桿菌感染組（P<0.05），恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后引起肺部促炎因子IFN-γ分泌程度隨清除時(shí)間增加而逐漸降低，而肺部抑炎因子IL-10分泌程度隨清除時(shí)間增加

7、而逐漸升高；恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物感染引發(fā)促炎因子IFN-γ分泌低于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組，而肺部抑炎因子IL-10分泌高于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組（P<0.05）。
　?。?）CBA檢測(cè)結(jié)果顯示，恥垢分枝桿菌感染宿主后分泌屬Th1型細(xì)胞亞群的促炎免疫細(xì)胞因子IFN-γ、IL-17和TNF低于大腸桿菌感染組，然而與Th1型免疫因子相互拮抗的Th2型細(xì)胞亞群的抑炎因子IL-4、IL-10分泌高于大腸桿菌感染組（P<0.05）

8、；恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后引起宿主抑炎因子IL-4分泌增加（P<0.05）；恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物單獨(dú)作用機(jī)體引發(fā)分泌抑炎因子IL-10明顯高于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組（P<0.01）。
　　結(jié)論：恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物是導(dǎo)致恥垢分枝桿菌清除速率低、不易被機(jī)體所清除的主要因素。其機(jī)制可能是通過(guò)降低宿主免疫系統(tǒng)炎性攻擊，降低Th1型免疫細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的攻擊，增加Th2型細(xì)胞因子分泌從而抑制Th1型細(xì)胞因子的分泌，進(jìn)而