基于中藥引經(jīng)理論研究齊墩果酸增強去甲斑蝥素肝靶向作用.pdf

1、肝癌是世界上第三大癌癥致死原因，肝癌患病人數(shù)在癌癥病人數(shù)中排名第六位。據(jù)估計2008年全球有695，900人死于癌癥，748，300人患有癌癥。更嚴(yán)重的是，世界上絕大部分的癌癥發(fā)病率還在增長，包括中歐、美國，過去20年歐洲的癌癥發(fā)病率翻倍。在亞洲國家，情況更加令人擔(dān)憂，一半的肝癌病例和肝癌死亡人數(shù)都發(fā)生在中國。去甲斑蝥素是斑蝥素的脫甲基類似物，可以抑制很多種人類癌癥細胞的增殖，特別是肝癌，并且很少引起腎毒性和發(fā)炎的副作用。值得注意的是去

2、甲斑蝥素可以刺激骨髓，明顯增加外周白細胞數(shù)量，使去甲斑蝥素在聯(lián)合化療中具有重要意義，因為現(xiàn)在使用的很多化療藥物有骨髓抑制的副作用。齊墩果酸是五環(huán)三萜類天然化合物，很多植物中都含有，比如人參的根和橄欖。有報道指出齊墩果酸對人類膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌和肝癌具有抑制作用。本課題基于中藥引經(jīng)理論研究齊墩果酸增強去甲斑蝥素的肝靶向作用，為了探討中藥引經(jīng)理論和藥物靶向性的相關(guān)性，為基于中藥引經(jīng)理論的現(xiàn)代靶向給藥系統(tǒng)的研究提供參考。
　　第一

3、部分:
　　目的:建立測定去甲斑蝥素齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體包封率的高效液相色譜法。方法:色譜柱為Thermo Sycronis C18柱，梯度洗脫，檢測波長為210nm，柱溫為30℃。超速離心法分離脂質(zhì)體中游離藥物。結(jié)果:去甲斑蝥素在20.0～300.0 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù) r為0.9998。平均回收率為99.15％～100.11％，RSD≤3.20％。齊墩果酸在10.0～150.0 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，

4、相關(guān)系數(shù)r為0.9997。平均回收率為99.22％～100.30％，RSD≤3.35％。結(jié)論:所建立的高效液相色譜法簡便，快速，可用于去甲斑蝥素齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體包封率的測定。
　　第二部分:
　　目的:制備去甲斑蝥素-齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體(NCTD-OA-LP)。方法:以薄膜分散法制備脂質(zhì)體，采用星點設(shè)計，以去甲斑蝥素和齊墩果酸的包封率為指標(biāo)，對兩種指標(biāo)進行歸一化處理，采用效應(yīng)面法優(yōu)化脂質(zhì)體的處方工藝。結(jié)果:篩選的最優(yōu)處方為

5、藥物和磷脂的重量百分比11.8％，膽固醇和磷脂的重量百分比17.2％，超聲時間20.0 min。復(fù)合脂質(zhì)體中，NCTD和OA的包封率分別為45.60％，80.69％。結(jié)論:經(jīng)星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化后制得的NCTD-OA-LP具有較好的包封率。
　　第三部分:
　　目的:建立可靠、靈敏度高的液相色譜質(zhì)譜法測定靜脈給藥后小鼠血漿、心、肝、脾、肺、腎中的去甲斑蝥素含量，并對方法進行確證。基于中藥引經(jīng)理論研究齊墩果酸增強去甲斑蝥素的

6、肝靶向作用，探討中藥引經(jīng)理論和藥物靶向性的相關(guān)性。方法:液相色譜使用C18(50mm×2.1 mm，1.7μm)色譜柱進行分離，流動相為甲醇-水（含0.25％甲酸），流速0.3 mL/min。檢測使用ESI源，采用正離子SIM工作模式。小鼠尾靜脈注射給藥，NCTD劑量為5 mg/kg，檢測血漿和各組織的NCTD濃度，計算藥動學(xué)參數(shù)，采用te、re、TEc評價去甲斑蝥素齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體和去甲斑蝥素脂質(zhì)體肝靶向性。結(jié)果:血漿中去甲斑蝥素在

7、0.15～12.00 ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9997。平均回收率為84.32％～91.06％，RSD≤8.28％。心中去甲斑蝥素在0.10～1.00μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9988。平均回收率為80.08％～86.61％，RSD≤12.17％。肝中去甲斑蝥素在0.40～12.80μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9990。平均回收率為83.62％～90.30％，RSD≤8.90％。脾

8、中去甲斑蝥素在0.20～6.40μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9993。平均回收率為82.32％～89.92％，RSD≤9.15％。肺中去甲斑蝥素在0.20～2.40μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9994。平均回收率為82.37％～87.32％，RSD≤9.29％。腎中去甲斑蝥素在0.20～2.40μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9987。平均回收率為81.89％～88.10％，RSD≤10.95

9、％。小鼠靜注去甲斑蝥素脂質(zhì)體組NCTD半衰期為3.46 h，平均滯留時間為4.80 h，清除率為223.99mL/h·kg，穩(wěn)態(tài)分布容積為1075.99mL/kg。小鼠靜注去甲斑蝥素齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體組NCTD半衰期為3.46 h，平均滯留時間為4.78 h，清除率為248.59 mL/h·kg，穩(wěn)態(tài)分布容積為1189.56mL/kg。小鼠靜注去甲斑蝥素齊墩果酸復(fù)合脂質(zhì)體組te-NCTD-OA和TEcNCTD-OA大于小鼠靜注去甲斑蝥素