KGF-2、bFGF核轉(zhuǎn)位機(jī)制的初步探討.pdf

1、KGF-2和bFGF同屬成纖維細(xì)胞生長因子家族,它們都是多效能的細(xì)胞因子,在許多重要的生理過程中發(fā)揮作用.這些過程包括細(xì)胞分化、增殖、血管生成、腫瘤發(fā)生、損傷修復(fù)、胚胎發(fā)育等.目前關(guān)于它們發(fā)揮作用的分子機(jī)制還不是十分清楚,我們根據(jù)分子生物學(xué)原理,結(jié)合基因重組、酵母雙雜交、哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交、細(xì)胞培養(yǎng)等方面對(duì)KGF-2和bFGP相互作用蛋白進(jìn)行了初步研究.研究結(jié)果可概述為以下幾個(gè)方面:一、采用PCR方法,從人胎肝cDN文庫中成功釣取了KG

2、F-2和bFGF基因.二、利用酵母雙雜交系統(tǒng)2篩選KGF-2和bFGF的相互作用蛋白.構(gòu)建KGF-2和bFGF的誘鉺蛋白載體pAS2-1-KGF-2和pAS2-1-bFGF并分別轉(zhuǎn)化至酵母宿主Y190,對(duì)KGF-2和bFGF自身的轉(zhuǎn)錄激活活性進(jìn)行了分析,結(jié)果表明KGF-2和bFGF自身不具有轉(zhuǎn)錄激活活性.通過對(duì)胎肝cDNA文庫的篩選,得到了2個(gè)與KGF-2存在相互作用的蛋白.序列分析和同源檢索表明:它們分別為未知蛋白PR02605和人核

3、糖體蛋白L22(RPL22).文獻(xiàn)檢索顯示它們都是新發(fā)現(xiàn)的可能和KGF-2發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì).目前對(duì)RPL22了解較多,它含有三個(gè)結(jié)構(gòu)域,分別是N-結(jié)構(gòu)域、I-結(jié)構(gòu)域和C-結(jié)構(gòu)域,在RPL22的N端有一個(gè)經(jīng)典的核定位信號(hào).KGF-2與RPL22之間的相互作用可能是其進(jìn)入細(xì)胞核的途徑之一.三、利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交系統(tǒng)在COS-7細(xì)胞內(nèi)驗(yàn)證了KGF-2與人核糖體蛋白L22間的相互作用.四、利用外源性KGF-2和bFGF刺激NIH/3T3