H2S對oxHDL誘導HUVECs凋亡的影響及其機制初步探討.pdf

1、目的：
　　探討外源性H2S對oxHDL誘導HUVECs凋亡的影響及其可能的初步機制
　　方法：
　　1. HUVECs分別經(jīng)不同濃度（100、200、300mg/L）oxHDL處理不同時間，以空白組和300 mg/L的HDL處理24h作為對照。分別采用Hoechst33258熒光染色觀察細胞核形態(tài)的變化，MTT比色法檢測細胞存活率的變化，酶標儀檢測細胞LDH釋放量的變化，以篩選出誘導HUVECs凋亡的最佳oxHDL濃

2、度。
　　2.用不同濃度NaHS（50,100,200μmol/L）預先處理HUVECs24h后，更換培養(yǎng)基，加入終濃度為300mg/L oxHDL處理HUVECs24h。采用Hoechst33258熒光染色觀察細胞核形態(tài)的變化，MTT法檢測細胞存活率的變化，酶標儀檢測細胞LDH釋放量的變化。
　　3.用200μmol/L的NaHS和20μmol/L的SB203580（p38 MAPK抑制劑)分別預先處理 HUVECs，然后

3、加入終濃度為300mg/L的oxHDL處理HUVECs24h。并采用RT-PCR和Western Blot檢測Caspase-3、Bcl-2、p38MAPK和p-p38MAPK的表達情況。
　　結果：
　　1.與正常對照組和HDL組相比，隨著oxHDL時間延長和濃度的遞增，凋亡細胞明顯增多、細胞存活率明顯下降、LDH釋放明顯增加，以300mg/L oxHDL作用最為明顯，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；
　　2.

4、NaHS預先處理可明顯拮抗由oxHDL誘導 HUVECs凋亡細胞的增多、存活率下降、LDH含量釋放的增加（oxHDL處理組相比），以200μmol/L的NaHS作用最為明顯，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3. RT-PCR和Western Blot檢測結果顯示，NaHS隨濃度遞增可部分阻斷由oxHDL誘導的Caspase-3表達上調和Bcl-2的表達下調（P<0.05）。
　　4. oxHDL處理HUVECs后，