單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞抗問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體感染能力差異及機(jī)制研究.pdf

1、背景及意義:鉤端螺旋體?。↙eptospirosis，鉤體?。┦且环N由致病性鉤端螺旋體（簡(jiǎn)稱(chēng)鉤體）感染所引起的全球分布的人獸共患傳染病，也是我國(guó)重點(diǎn)監(jiān)控和防疫的主要傳染病之一。問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體（Leptospira interrogans）黃疸出血群賴(lài)株為我國(guó)流行最廣的致病菌。單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞是固有免疫中兩種主要的吞噬細(xì)胞，在抵御病原菌感染時(shí)起著重要作用。然而，在鉤體感染宿主過(guò)程中，上述兩種吞噬細(xì)胞對(duì)鉤體的吞噬、殺滅作用及其機(jī)制

2、尚未完全闡明，本文探索了在問(wèn)號(hào)鉤體感染過(guò)程中，單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞吞噬、殺滅鉤體的差異及其機(jī)制。
　　方法:采用免疫組化檢測(cè)鉤體感染C3H/HeJ小鼠后肺、肝、腎組織中外周血來(lái)源的單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。采用HE染色法檢測(cè)鉤體感染小鼠肺、肝、腎組織中的病理變化。采用蛋白芯片檢測(cè)感染小鼠或鉤體病病人血清中趨化因子的變化。采用免疫組化檢測(cè)感染小鼠肺、肝、腎組織中粘附因子（VCAM-1、E-選擇素、P-選擇素和ICAM-

3、1）的表達(dá)水平。建立問(wèn)號(hào)鉤體黃疸出血群賴(lài)型賴(lài)株感染人THP-1單核-巨噬細(xì)胞、人外周血單核-巨噬細(xì)胞、小鼠J774A.1巨噬細(xì)胞、小鼠外周血單核-巨噬細(xì)胞、人HL-60中性粒細(xì)胞、人外周血中性粒細(xì)胞和小鼠外周血中性粒細(xì)胞模型。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)感染過(guò)程中不同吞噬細(xì)胞吞噬鉤體的能力。采用細(xì)菌計(jì)數(shù)板定量檢測(cè)感染過(guò)程中不同吞噬細(xì)胞內(nèi)鉤體的數(shù)量。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)感染過(guò)程中胞內(nèi)鉤體活力。采用
　　熒光分光光度法檢測(cè)不同

4、吞噬細(xì)胞對(duì)鉤體的殺滅能力。胞內(nèi)鉤體的存活情況和體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)情況分別由細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)和細(xì)菌計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)檢測(cè)。采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)不同吞噬細(xì)胞內(nèi)鉤體與溶酶體共定位率。不同吞噬細(xì)胞內(nèi)總活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和游離Ca2+濃度([Ca2+]i)在感染過(guò)程中的變化和對(duì)鉤體死亡率的影響分別由激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和熒光分光光度法檢測(cè)。
　　結(jié)果:問(wèn)號(hào)鉤體賴(lài)株感染C3H/HeJ小鼠后，肺、肝、腎組織中出現(xiàn)大量外周血來(lái)源的單核-巨

5、噬細(xì)胞浸潤(rùn)，而在上述組織中只檢測(cè)到少量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。在感染小鼠或鉤體病病人血清中單核-巨噬細(xì)胞趨化因子與正常小鼠或人相比顯著升高(p＜0.05)。而中性粒細(xì)胞趨化因子水平無(wú)顯著變化。同時(shí)，感染小鼠肺、肝、腎組織內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子（VCAM-1、E-選擇素和P-選擇素）與正常小鼠相比顯著升高(p＜0.05)，而ICAM-1與正常小鼠相比無(wú)顯著變化。人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞（人THP-1單核-巨噬細(xì)胞、人外周血單核-巨噬細(xì)胞、小鼠J7

6、74A.1巨噬細(xì)胞和小鼠外周血單核-巨噬細(xì)胞）吞噬與殺滅鉤體的能力顯著強(qiáng)于相應(yīng)的中性粒細(xì)胞（HL-60中性粒細(xì)胞、人外周血中性粒細(xì)胞和小鼠外周血中性粒細(xì)胞）(p＜0.05)。鉤體感染過(guò)程中人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)總ROS、NO水平和[Ca2+]i顯著高于相應(yīng)的中性粒細(xì)胞(p＜0.05)，抑制細(xì)胞內(nèi)總ROS、 NO、游離Ca2+后會(huì)顯著降低胞內(nèi)鉤體的死亡率(p＜0.05)。人或小鼠單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)鉤體與溶酶體的共定位率顯著高于相應(yīng)的中性粒