鉤端螺旋體脂多糖誘生炎性細胞因子及小鼠感染組織中單核-巨噬細胞浸潤.pdf

1、目的：了解問號鉤端螺旋體（Leptospira interrogans）脂多糖（lipopolysaccharide，L-LPS）誘生人單核細胞或小鼠單核-巨噬細胞產(chǎn)生炎性細胞因子的作用以及問號鉤端螺旋體感染小鼠內(nèi)臟組織中外周血單核-巨噬細胞浸潤的情況。
　　方法：采用酚水法提取問號鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株L-LPS，分別用LPS定量試劑盒和鱟試驗試劑盒測定L-LPS濃度和內(nèi)毒素活性。采用人或小鼠細胞因子抗體芯片，檢測人THP

2、-1單核細胞或小鼠J774A.1單核-巨噬細胞受L-LPS作用或被問號鉤端螺旋體賴株感染24或48 h后產(chǎn)生細胞因子情況。采用小鼠細胞因子抗體芯片檢測問號鉤端螺旋體賴株感染C3H/HeJ小鼠血清細胞因子。以兔抗小鼠外周血單核-巨噬細胞特異性CD68-IgG為一抗、HRP標記驢抗兔IgG為二抗，采用免疫組化法檢測C3H/HeJ小鼠感染問號鉤端螺旋體賴株5、7或10 d后肺、肝、腎組織中外周血來源的CD68+單核-巨噬細胞的浸潤情況。

3、>　　結(jié)果：1×109問號鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株可提取約1μg的L-LPS。L-LPS凝固鱟試劑所需最低濃度為0.5ng/mL，為大腸埃希菌脂多糖(E-LPS)活性1/5(0.1ng/mL)。L-LPS作用THP-1細胞24或48h后有29種細胞因子水平顯著升高，其中嗜酸細胞活化趨化因子(eotaxin)、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)、單核細胞趨化因子（1-309）、白細胞介素-

4、1α(IL-1α)、IL-6、IL-12p40、單核細胞趨化蛋白-2（MCP-2）、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和干擾素γ誘導單核因子(MIG)10種細胞因子水平升高5倍以上(p＜0.01)，eotaxin-2、IFN-γ、IL-3、IL-10、IL-11、IL-12p70、MCP-1、巨噬細胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)、G-CSF、IL-1β、IL-7、IL-13、IL-15、干擾素誘導蛋白-10(IP-10)、M-CSF、MI

5、P-1δ、TGF-β1、可溶性TNF受體Ⅰ(sTNF RⅠ)和血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB)19種細胞因子水平升高1.5～＜5倍(p＜0.05)。L-LPS作用J774A.1細胞24或48 h后有9種細胞因子水平升高，其中G-CSF、IL-6、IL-10、TNF-α、T細胞和單核及嗜酸性粒細胞CC亞族趨化因子(RANTES)5種細胞因子水平升高5倍以上(p＜0.01)，MCP-1、IL-12p40、IL-1β和可溶性TNF受

6、體Ⅱ(sTNF RⅡ)4種細胞因子水平升高升高1.5～＜5倍(p＜0.05)。問號鉤端螺旋體賴株感染細胞上清以及問號鉤端螺旋體賴株感染小鼠血清中細胞因子檢測結(jié)果與上述L-LPS作用細胞相似。問號鉤端螺旋體賴株感染C3H/HeJ小鼠5d后肺、肝和腎組織中出現(xiàn)CD68+單核-巨噬細胞浸潤，感染7或10d時上述組織內(nèi)CD68+單核-巨噬細胞數(shù)量不斷增加，肺和腎組織出現(xiàn)結(jié)構(gòu)模糊、細胞裂解等組織破壞現(xiàn)象。
　　結(jié)論：L-LPS具有很強的誘導