基于微流控技術(shù)的鹽酸克倫特羅免疫分析檢測系統(tǒng)研究.pdf

1、鹽酸克倫特羅（clenbuterol hydrochloride，CL）又名瘦肉精，作為一種動(dòng)物飼料添加劑常用于提高牲畜的瘦肉率，人食用含有過量CL的肉制品，會(huì)出現(xiàn)頭昏、肌肉抽動(dòng)、神經(jīng)過敏等一系列癥狀，嚴(yán)重可致死亡。目前國內(nèi)外檢測動(dòng)物性源食品中CL含量的方法主要有精密儀器定量分析和現(xiàn)場快速檢測兩大類。其中精密設(shè)備定量分析方法費(fèi)用高昂、檢測時(shí)間長，對操作人員有較高技術(shù)要求，難以進(jìn)行快速、實(shí)時(shí)、大批量檢測?，F(xiàn)場快速檢測方法中的試紙條法雖然具

2、有成本低廉、檢測時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，但是該方法檢出限低，靈敏度不高，需要上述精密儀器定量分析方法的進(jìn)一步確證。本文將從實(shí)驗(yàn)研究的角度出發(fā)，將微流控技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(enzyme-linked immunosorbent asssy，ELISA)和床邊診斷技術(shù)(Point of care test，POCT)相結(jié)合，將傳統(tǒng)的ELISA試劑盒方法轉(zhuǎn)移至微流控芯片中，建立一種新的便于大批量現(xiàn)場篩查的CL殘留的快速檢測技術(shù)。具體內(nèi)容包括:

3、>　　1)基于ELISA間接競爭法，對微流控芯片的進(jìn)樣、流道、反應(yīng)池、廢液池等結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和設(shè)計(jì);從穩(wěn)定性、加工性能、性價(jià)比等角度微流控芯片的材料進(jìn)行了選擇，分析了微流控芯片的加工方法;對各種驅(qū)動(dòng)方法比較后確定了穩(wěn)定性高、驅(qū)動(dòng)能力強(qiáng)的微泵閥系統(tǒng)作為流體驅(qū)動(dòng)的方案;為了減少蠕動(dòng)泵脈動(dòng)造成的進(jìn)樣誤差，本文設(shè)計(jì)了一種通過時(shí)間控制法來準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量的方法，使定量控制性能得到了大大提高。
　　2)搭建了微泵閥驅(qū)動(dòng)的微流控芯片CL檢測硬件平

4、臺(tái)，首先對微泵閥的選型進(jìn)行了調(diào)研，設(shè)計(jì)了四泵閥驅(qū)動(dòng)結(jié)構(gòu)，對流體的驅(qū)動(dòng)性能進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)測試;搭建了恒溫系統(tǒng)，建立了可控的恒溫環(huán)境;設(shè)計(jì)制作了便攜式光學(xué)檢測裝置，獲得靈敏度高、響應(yīng)速度快的吸光度分析。
　　3)進(jìn)行了微流控免疫分析技術(shù)的生物學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)研究，考察了CL抗原包被、試劑消耗量、試劑反應(yīng)和顯色時(shí)間、洗滌的次數(shù)、最低檢出限等參數(shù)之間的關(guān)系，繪制出CL標(biāo)準(zhǔn)曲線。對微泵閥進(jìn)行洗滌測試，得到了最低檢出限，并對加標(biāo)回收率進(jìn)行了測試，對反應(yīng)