鉛對(duì)小鼠Y染色體Sxrb區(qū)Ddx3y基因表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：鉛是一種最常見的有毒重金屬，對(duì)全身各系統(tǒng)和器官都具有毒性作用。鉛除了具有神經(jīng)、造血、消化、內(nèi)分泌、泌尿及免疫等系統(tǒng)的毒性外，還具有生殖毒性。大量流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，鉛具有較強(qiáng)的雄性生殖毒性，可影響精子的形成和發(fā)育，降低精子質(zhì)量，但其毒作用機(jī)制并不清楚。Ddx3y是Y染色體Sxrb區(qū)重要的性基因，與生精過程有著密切的聯(lián)系。Ddx3y基因?qū)儆贒EAD盒蛋白家族ATP依賴性的RNA解旋酶，參與生精細(xì)胞內(nèi)從RNA合成到降解的幾

2、乎所有RNA的代謝過程，在生精細(xì)胞生長發(fā)育過程中扮演著不可或缺的角色。
　　 目的：研究亞慢性醋酸鉛暴露對(duì)小鼠精子發(fā)育以及睪丸、附睪組織中Y染色體性基因Ddx3y表達(dá)的影響，并探討其內(nèi)在聯(lián)系，為闡明鉛的雄性生殖毒作用機(jī)制提供分子毒理學(xué)依據(jù)。
　　 方法：SPF級(jí)雄性小鼠48只，體重18-22g。按體重將小鼠隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、25ppm醋酸鉛染毒組，50ppm醋酸鉛染毒組和100ppm醋酸鉛染毒組。動(dòng)物自然飲水和飲食

3、，室溫18～25℃。通過自然飲用含不同濃度醋酸鉛水的方式對(duì)小鼠染毒，連續(xù)染毒60天后取樣。用顯微鏡觀察不同染鉛組睪丸和附睪組織形態(tài)學(xué)改變并記錄精子畸形數(shù)，對(duì)比精子畸變率變化。應(yīng)用Real Time PCR技術(shù)檢測(cè)性基因Ddx3y的mRNA表達(dá)水平，Western blotting和免疫組化方法檢測(cè)Ddx3y蛋白的表達(dá)及分布。應(yīng)用SPSS16.0軟件，采用單因素方差分析方法，比較不同染鉛組與對(duì)照組之間的結(jié)果有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。組間比較采用LS

4、D檢驗(yàn)法，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：鉛暴露引起小鼠睪丸和附睪組織形態(tài)學(xué)發(fā)生異常改變，睪丸曲細(xì)精管內(nèi)細(xì)胞排列松散、紊亂、層次不清，精原細(xì)胞層和初級(jí)精母細(xì)胞層之間間隙變寬，且隨著染鉛濃度的增加生精細(xì)胞明顯減少。染鉛組小鼠附睪管內(nèi)基細(xì)胞變小，管腔變薄。而且，染鉛組小鼠精子畸形率明顯高于對(duì)照組。Real Time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，染鉛組小鼠睪丸和附睪組織中Ddx3y基因表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組，且有劑量-反應(yīng)關(guān)

5、系。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，染鉛組的小鼠睪丸和附睪組織中Ddx3y蛋白表達(dá)均明顯低于對(duì)照組，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系。免疫組化結(jié)果顯示，Ddx3y蛋白主要分布在精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞中，在附睪中主要分布在基細(xì)胞中。隨著染鉛劑量的增加，睪丸和附睪組織中Ddx3y蛋白免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯降低。
　　 結(jié)論：亞慢性鉛暴露可影響小鼠精子的發(fā)生、發(fā)育，下調(diào)睪丸和附睪組織中Y染色體Sxrb區(qū)Ddx3y基因及其蛋白的表達(dá)，提示Dd