CalpaiN-2在運動改善肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用及相關(guān)機制研究.pdf

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)是指由于各種原因?qū)е碌募毎麅?nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)功能發(fā)生紊亂，蛋白質(zhì)合成受到影響的病理、生理過程。而肝臟作為人體內(nèi)重要的代謝器官，其出現(xiàn)ERS可誘發(fā)一系列代謝性疾病，肝臟ERS已成為諸多疾病的重要風(fēng)險因素，危害到人類健康。Calpain-2是鈣激活中性蛋白酶，最新的研究表明，Calpain-2在人體內(nèi)的激活可能參與到某些病理

2、活動中去，如肝臟ERS。但Calpain-2在肝臟ERS中的作用及相關(guān)機制目前尚不清楚。
　　研究目的:
　　本研究通過對SD大鼠進行8周高脂飲食喂養(yǎng)后成功建立大鼠肝臟ERS動物模型，并對高脂飲食組大鼠實施8周游泳運動干預(yù)，探究Calpain-2在運動改善肝臟ERS中的作用及相關(guān)機制，為運動作為非藥物療法治療相關(guān)疾病提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　30只雄性SD大鼠隨機分成對照組（C組）、高脂飲食ERS模型組

3、(HF組)、高脂飲食ERS模型運動組（HE組），每組10只。其中，C組大鼠用基礎(chǔ)飼料（碳水化合物65％，蛋白質(zhì)22％，脂肪13％）喂養(yǎng)，HF組和HE組大鼠均使用高脂飼料喂養(yǎng)（碳水化合物33％，蛋白質(zhì)22％，脂肪45％），HE組大鼠在喂養(yǎng)高脂飼料的同時施以8周無負(fù)重游泳運動干預(yù)。8周后對三組大鼠進行取材，用比色法(enzymatic colorimetric as say)檢測大鼠血清游離脂肪酸(free fatty acids，F(xiàn)FAs

4、)含量;用免疫印跡法(westernblotting)檢測大鼠肝臟Calpain-2、自噬相關(guān)基因7(autophagy related gene，Atg7)的蛋白表達變化;用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測大鼠肝臟Calpain-2、Atg7、CCAAT/增強子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologus protein，Chop)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose re

5、gulated protein78，Grp78）的基因表達水平。
　　研究結(jié)果:
　　(1)與C組相比，HF組大鼠肝臟組織中Grp78、Chop、EIF2αmRNA顯著升高(p＜0.01)，說明大鼠肝臟ERS模型建立成功。
　　(2)與C組相比，HF組大鼠血漿FFAs含量顯著增加，肝臟組織中Calpain-2mRNA及蛋白表達水平顯著增加，Atg7 mRNA及蛋白表達水平顯著降低(p＜0.01)，說明高脂飲食可通過上調(diào)

6、肝臟中Calpain-2的表達，抑制肝臟中Atg7的表達水平進而誘導(dǎo)ERS的標(biāo)志物Grp78、Chop及EIF2α的出現(xiàn)。
　　(3)與HF組相比，HE組大鼠血清FFAs含量顯著下降，肝臟組織中Calpain-2mRNA及蛋白表達水平顯著降低，Atg7 mRNA及蛋白表達水平顯著升高(p＜0.01)，繼而使得ERS標(biāo)志物Grp78、Chop及EIF2α mRNA表達水平下降，說明游泳運動可有效緩解肝臟ERS。
　　結(jié)論: