β-arrestin2及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在隱腦患者發(fā)病機(jī)制中的探討.pdf

1、目的:隱球菌性腦膜炎(CryptococcalMeningitisCM,簡稱隱腦)是由新型隱球菌(CryptococcusneoformansCn,簡稱隱球菌)侵犯腦膜和/或腦實(shí)質(zhì)引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病。主要見于免疫功能受損患者及少數(shù)免疫功能正常者。在國外隱腦患者多為HIV陽性患者,國內(nèi)隱腦患者多為器官移植,長期應(yīng)用免疫抑制劑、激素,存在基礎(chǔ)疾病患者。近年來隨著激素、免疫抑制劑、廣譜抗生素應(yīng)用的增加,器官移植、顱內(nèi)有創(chuàng)檢查、國內(nèi)艾

2、滋病的流行以及實(shí)驗(yàn)室檢測水平的提高,隱腦發(fā)病率有明顯上升趨勢。由于目前抗真菌藥物的不足,顱內(nèi)并發(fā)癥的發(fā)生,隱腦的死亡率仍然很高。研究表明機(jī)體感染隱球菌后的轉(zhuǎn)歸很大程度上取決于細(xì)胞因子的分布和機(jī)體免疫狀況。本研究通過檢測隱球菌性腦膜炎患者腦脊液中的細(xì)胞因子β-arrestin2的含量,探討其在發(fā)病機(jī)制中的意義,為隱腦治療提供新的治療方向;并利用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)對腦脊液細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物ATF4進(jìn)行觀測。
　　 方法:20

3、09年6月至2012年6月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科和兒科的住院及門診患者。根據(jù)所患疾病將50例患者分為2組,一組為病例組(25例):隱球菌性腦膜炎患者;另一組為對照組(25例)包括缺血管性頭痛患者22例,癔病患者1例,缺血性腦血管病患者1例,支氣管肺炎患者1例。其中病例組包括兩組:治療前組與治療后組。所有入組患者均行腰椎穿刺術(shù)檢查,腦脊液標(biāo)本送檢常規(guī)、生化,并行腦脊液細(xì)胞學(xué)系列(MGG,阿利新蘭染色)檢查,應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附

4、法(ELISA)法定量測定腦脊液標(biāo)本中的β-arrestin2含量;免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法以FITC熒光二抗及Hoechst分別標(biāo)記抗ATF4、細(xì)胞核DNA,置于激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)下觀察。
　　 結(jié)果:
　　 1.臨床資料
　　 隱球菌性腦膜炎患者可表現(xiàn)為頭疼、發(fā)熱、腦膜刺激征陽性、顱高壓癥狀、意識障礙、癲癇發(fā)作等。25例隱腦患者均有不同程度的頭痛(100％),23例患者中有腦膜刺激征者18例(78

5、.26％),17例患者出現(xiàn)發(fā)熱(73.92％),5例患者出現(xiàn)了顱神經(jīng)(常見視、聽、外展神經(jīng))損傷(21.74％),6例患者出現(xiàn)意識障礙(26.09％),2例患者出現(xiàn)癲癇發(fā)作(8.70％),2例患者乏臨床資料。
　　 基礎(chǔ)病情況,25例患者中17例患者存在基礎(chǔ)病(68％),7例患者無明確既往病史,1例患者既往病史不詳。
　　 治療后腦脊液內(nèi)隱球菌計(jì)數(shù)情況,經(jīng)治療后菌轉(zhuǎn)陰者4例(16％),菌明顯減少者15例(60％),菌未明

6、顯減少但腦脊液細(xì)胞學(xué)好轉(zhuǎn)者6例(24％)。經(jīng)治療病情無好轉(zhuǎn)死亡者2例(1例患者腦脊液中隱球菌計(jì)數(shù)減少,1例患者腦脊液中隱球菌計(jì)數(shù)未見減少),死亡率為8％。
　　 2.腦脊液常規(guī)、生化檢查結(jié)果
　　 隱腦組23例患者的腦脊液常規(guī),生化結(jié)果(病例組2例患者缺乏臨床資料):隱腦治療前組腦脊液總細(xì)胞數(shù)平均值138.52±160.08×106/L;白細(xì)胞數(shù)平均值53.22±59.07×106/L;葡萄糖含量平均值為2.55±1.0

7、6mmol/L;蛋白含量平均值為0.68±0.47g/L;氯化物含量平均值為118.95±6.15mmol/L。隱腦治療后組腦脊液總細(xì)胞數(shù)平均值為201.43±525.02×106/L;白細(xì)胞數(shù)平均值為16.04±28.47×106/L;葡萄糖含量平均值為3.28±1.20mmol/L;蛋白含量平均值為0.54±0.24g/L;氯化物含量平均值為124.43±5.56mmol/L。對照組總細(xì)胞平均值為9.43±17.04×106/L;白

8、細(xì)胞平均值為0.91±1.31×106/L;葡萄糖平均值為3.28±0.43mmol/L;蛋白含量平均值為0.29±0.08g/L;氯化物含量平均值為123.63±2.64mmol/L。
　　 隱球菌性腦膜炎治療前組腦脊液中總細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、蛋白含量與對照組相比較高,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;隱球菌性腦膜炎治療前組腦脊液中的葡萄糖、氯化物含量與對照組相比較低,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但隱球菌性腦膜炎治療前后兩

9、組相比,腦脊液中蛋白、氯化物、葡萄糖含量均無明顯差異性,P＞0.05,不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.腦脊液細(xì)胞學(xué)反應(yīng)特點(diǎn)
　　 病例組25例患者治療后與治療前相比,4例患者腦脊液隱球菌轉(zhuǎn)陰,15例患者腦脊液隱球菌明顯減少,6例患者腦脊液隱球菌未見明顯減少,但腦脊液細(xì)胞學(xué)較前好轉(zhuǎn)。病例組中3例患者缺乏腦脊液細(xì)胞學(xué)細(xì)胞計(jì)數(shù)資料,余22例患者治療前腦脊液細(xì)胞學(xué)嗜中性粒細(xì)胞水平0～90％,中位值:11.5％;治療后嗜中性粒細(xì)胞明

10、顯減少0～8.7％,中位值:1％,且淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞比例趨向于正?；?。經(jīng)比較治療前后腦脊液細(xì)胞學(xué)中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002＜0.005)。
　　 4.腦脊液中β-arrestin2含量測定
　　 隱腦組治療前腦脊液β-arrestin2水平為(16.59～137.55)pg/ml,含量平均值為35.45±25.41pg/ml;隱腦組治療后腦脊液β-arrestin2水平為(13.39～35.36

11、)pg/ml,含量平均值為16.57±6.05pg/ml;對照組腦脊液β-arrestin2水平為(12.26～19.04)pg/ml,含量平均值為15.39±2.02pg/ml;經(jīng)比較病例組治療前與治療后差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;病例組治療前與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;病例組治療后與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 25例隱腦患者中,治療后腦脊液隱球菌明顯減少(包括轉(zhuǎn)陰者)的19例患者,治療前腦脊液β-arrestin2水平為(16

12、.59～137.55)pg/ml,含量平均值為35.89±28.55pg/ml;治療后腦脊液β-arrestin2水平為(13.39～33.11)pg/ml,含量平均值為18.17±5.57pg/ml。治療后腦脊液隱球菌未明顯減少的6例患者,治療前腦脊液β-arrestin2水平為(19.50～41.41)pg/ml,含量平均值為25.72±8.46pg/ml;治療后腦脊液β-arrestin2水平為(14.97～35.36)pg/ml

13、,含量平均值為20.77±7.61pg/ml;經(jīng)比較病例組菌明顯減少者與菌未明顯減少者治療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,治療后差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.腦脊液細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物ATF4變化
　　 應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色,觀察4例隱腦患者及3例對照組患者腦脊液細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物ATF4:隱腦組4例患者,可見ATF4進(jìn)入細(xì)胞核,且表達(dá)量明顯增多;對照組3例患者,ATF4位于細(xì)胞質(zhì)中,且量極少。
　　 結(jié)論:

14、　　 1.隱球菌性腦膜炎臨床表現(xiàn)多樣,缺乏特異性,且病死率較高。
　　 2.隱球菌為機(jī)會致病菌,隱球菌性腦膜炎常見于免疫受損患者,對于免疫受損患者出現(xiàn)腦膜刺激征時(shí),應(yīng)高度警惕隱球菌性腦膜炎。
　　 3.隱球菌性腦膜炎患者治療前腦脊液中β-arrestin2含量高于對照組腦脊液中β-arrestin2含量,隱腦治療前組與治療后組相比,腦脊液中β-arrestin2含量較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.隱球菌性腦