RAGE及配體在矽肺發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：探討晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（Receptor for Advanced Glycation End-Products RAGE）及配體—S100（鈣粒蛋白）、高遷移率族蛋白-1（high mobility groupbox chromosAlprotein 1，HMGB-1）在矽肺發(fā)病中的作用。
　　 方法：矽肺模型制備：選用健康雄性c57小鼠60只，隨機分為SiO2染塵組和空白對照組。
　　 SiO2組設(shè)3、7、

2、14、21和42天5個觀察時點，每組6只。染塵采用氣管切開注入方法，劑量為400mg/kg/只。樣品收集與指標測定：于相應(yīng)觀察時間處死動物，腹主動脈取血，收集血清；用支氣管盥洗法收集盥洗液。應(yīng)用細胞涂片法，在顯微鏡下計數(shù)盥洗液中中性粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞的數(shù)量；取肺組織，左肺液氮速凍，提取組織蛋白。右肺10％多聚甲醛固定,石蠟包埋，作病理切片厚度為4μm。用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中HMGB-1和腫瘤壞死因子-α（tum

3、our necrosis factor-alpha TNF-α）的含量，同時檢測肺盥洗液中HMGB-1的水平。用免疫印跡方法（Western blot）定量檢測肺組織RAGE的表達；用免疫熒光組織化學(xué)方法定性檢測RAGE及S100在鼠肺組織中的表達。
　　 結(jié)果：1.肺盥洗液中炎性細胞計數(shù)表明：染SiO2粉塵3-7天肺泡巨噬細胞明顯升高，此后隨著染塵時間延長，巨噬細胞的含量降低；而中性粒細胞的峰值出現(xiàn)在染塵的7-14天，淋巴細胞

4、主要在染塵21天表現(xiàn)明顯升高，染塵組肺盥洗液中三種炎性細胞的水平與對照組比較有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.01；染塵42天，炎癥細胞減少；2.肺盥洗液中TNF-α和HMGB-1檢測結(jié)果顯示：在各觀察時間點，實驗組TNF-α和HMGB-1較對照組明顯升高，顯示有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05，實驗組不同觀察時間點比較，TNF-α在3-14天階段，TNF-α隨時間延長而升高，21天以后隨觀察時間的延長而下降；而HMGB-1的水平隨觀察時間延長

5、呈直線上升。各時點間比較有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。3.血清中HMGB-1結(jié)果表明：實驗組3-21天觀察期間隨時間的延長而上升，42天時顯示下降；4.免疫組織化學(xué)法和Western bolt檢測肺組織中RAGE結(jié)果所見：肺組織中RAGE隨染塵時間的延長熒光強度逐漸減弱，差異顯示了明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05，與Western bolt結(jié)果一致。在肺組織中，RAGE主要定位于支氣管上皮細胞、肺泡巨噬細胞，存在于胞膜和胞漿。5.免疫組織化學(xué)法檢測

6、S100結(jié)果表明隨染塵時間延長熒光強度顯著升高，與空白對照比較有明顯統(tǒng)計學(xué)差異，（P<0.05）。S100定位于胞漿、胞膜和肺組織中。
　　 結(jié)論：1.矽肺模型炎癥反應(yīng)主要表現(xiàn)在7～14天，中性粒細胞、TNF-α參與了炎癥反應(yīng)；2.在矽肺發(fā)病過程中，HMGB-1和S100持續(xù)升高，RAGE表達明顯下降，提示HMGB-1和S100不僅參與炎癥反應(yīng)，可能在矽肺纖維化的過程中起一定的作用。同時提示RAGE在維持正常肺組織的生理功能起著