?；撬崤cDFP聯(lián)合使用對鋁致神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究和探討?；撬崤c1，2-二甲基-3-羥基-吡啶酮(DFP)聯(lián)合作用拮抗鋁致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的作用。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　將84只健康雄性SPF級Wistar大鼠按體重(180-220g)隨機(jī)分為7組，每組12只。采用灌胃方式進(jìn)行染毒，每天1次。陰性對照組連續(xù)8周給予1.0 ml/d生理鹽水。在前4周，鋁染毒組、?；撬峤M、低劑量DFP組、高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組以及?；撬?/p>

2、+高劑量DFP組分別給予281.40 mg/kgAlCl3溶液;在后4周，各實(shí)驗(yàn)組分別給予1.0 ml生理鹽水、400 mg/kg Tau、13.82 mg/kgDFP、27.44 mg/kg DFP、400 mg/kg Tau、400 mg/kg Tau;?；撬?低劑量DFP組以及?；撬?高劑量DFP組給予400 mg/kg Tau6 h后分別給予13.82、27.44 mg/kgDFP。
　　每組隨機(jī)選擇2只大鼠，麻醉后采用4

3、％多聚甲醛灌注腦組織，用于海馬細(xì)胞凋亡情況的檢測。其他剩余大鼠在染毒結(jié)束后禁食24h，采用斷頭取血，收集血液，并迅速剖離出腦組織，分離出皮層和海馬，保存?zhèn)溆谩?br>　　2.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠皮層抗氧化系統(tǒng)的影響
　　在分離出大鼠皮層后，準(zhǔn)確稱重，按質(zhì)量體積比加入4℃的生理鹽水手動(dòng)研磨制成大鼠皮層勻漿。對各組大鼠皮層丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力值進(jìn)行檢測

4、，以探究DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠皮層氧化損傷的恢復(fù)作用。
　　3.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響
　　大鼠斷頭取血后，靜置離心收集血清。對各組大鼠血清丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力值進(jìn)行檢測，以探究DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠血清氧化損傷的恢復(fù)作用。
　　4.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠皮層中ATPase活力的影響

5、
　　在分離出大鼠皮層后，準(zhǔn)確稱重，按質(zhì)量體積比加入4℃的生理鹽水手動(dòng)研磨制成大鼠皮層勻漿。對大鼠皮層中Mg2+-ATPase、Na+ K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力進(jìn)行測定，研究DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁致大鼠皮層ATPase活力下降的拮抗作用。
　　5.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠全血中ATPase活力的影響
　　取各組大鼠的部分抗凝全血制成溶血液。對大鼠全血中Mg2+-ATPase、Na+

6、K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力進(jìn)行測定，研究DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁致大鼠全血中ATPase活力下降的保護(hù)作用。
　　6.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響
　　染毒結(jié)束后，采用4％多聚甲醛進(jìn)行灌注以固定大鼠腦組織，并制作石蠟切片。采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測定法（TUNEL）法檢測凋亡總體情況，RT-PCR法檢測Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá)水平，Wester

7、n法檢測Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3表達(dá)水平，研究DFP與?；撬崧?lián)合作用對染鋁致大鼠海馬細(xì)胞凋亡的拮抗作用。
　　結(jié)果：
　　1.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠皮層抗氧化系統(tǒng)的影響
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠大腦皮層中SOD以及GSH-Px活力明顯降低，MDA含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與鋁染毒組相比，?；撬峤M、高劑量DFP組、?；撬?低劑量DFP組、?；撬?高

8、劑量DFP組大鼠大腦皮層抗氧化酶活力均明顯提高，而MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，?；撬?低劑量DFP組大鼠皮層的GSH-Px和SOD活力較?；撬峤M和低劑量DFP組均有顯著提升（P＜0.05），同時(shí)MDA的含量明顯降低（P＜0.05）;與牛磺酸組相比，牛磺酸+高劑量DFP可以顯著提高GSH-Px和SOD的活性，降低MDA的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其余各組間差異沒有

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠血清中GSH-Px活力明顯降低，MDA含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與鋁染毒組相比，?；撬峤M、高劑量DFP組、?；撬?低劑量DFP組、?；撬?高劑量DFP組大鼠血清中GSH-Px活力均明顯提高，而MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，?；撬?低劑量

10、DFP組大鼠血清的GSH-Px活力較?；撬峤M和低劑量DFP組均有顯著提升（P＜0.05），同時(shí)MDA的含量明顯降低（P＜0.05）;與牛磺酸組相比，牛磺酸+高劑量DFP可以顯著提高血清GSH-Px的活性，降低MDA的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其余各組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠皮層中ATPase活力的影響
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠大腦皮層中Na+K+-ATPas

11、e、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與鋁染毒組相比，?；撬峤M、高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組、牛磺酸+高劑量DFP組大鼠皮層中ATPase活力均明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，牛磺酸+低劑量DFP組大鼠皮層的Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力較牛磺酸組和低劑量DFP組均有顯著提升(

12、P＜0.05)。?；撬峤M相比，?；撬?高劑量DFP可以顯著提高皮層Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.DFP與?；撬崧?lián)合作用對鋁暴露大鼠全血中ATPase活力的影響
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠全血中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

13、(P＜0.05)。與鋁染毒組相比，高劑量DFP組、?；撬?低劑量DFP組、?；撬?高劑量DFP組大鼠全血中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力均明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，?；撬?低劑量DFP組大鼠全血的Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力較?；撬峤M和低劑量DFP組均有顯著提升(P＜0.05)。牛磺酸組相比，

14、牛磺酸+高劑量DFP可以顯著提高全血Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對鋁暴露大鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響
　　陰性對照組中可觀察到的凋亡細(xì)胞極少;與陰性對照組比較，鋁染毒組的凋亡細(xì)胞占全部神經(jīng)細(xì)胞比例明顯增加;與鋁染組相比，?；撬峤M、低劑量DFP組、高劑量DFP組、?；撬?低劑量DFP組

15、以及?；撬?高劑量DFP組的凋亡細(xì)胞均有一定程度的下降;其中?；撬?高劑量DFP組凋亡細(xì)胞明顯下降，接近陰性對照組。
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠海馬中Bcl-2的mRNA表達(dá)量明顯降低，Bax的mRNA表達(dá)量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與鋁染毒組相比，牛磺酸、低劑量DFP、高劑量DFP、?；撬?低劑量DFP、?；撬?高劑量DFP均可以顯著增強(qiáng)Bcl-2的mRNA表達(dá)量(P＜0.05)，降低Bax的mRNA表

16、達(dá)量(P＜0.05)。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，牛磺酸與DFP聯(lián)合用藥組大鼠海馬的Bcl-2的mRNA表達(dá)量較?；撬峤M或DFP組均有顯著提升(P＜0.05)，而Bax的mRNA表達(dá)量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　與陰性對照相比，鋁染毒組的大鼠海馬中Bcl-2的蛋白表達(dá)量明顯降低，同時(shí)Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與鋁染毒組相比，?；撬?、

17、低劑量DFP、高劑量DFP、?；撬?低劑量DFP、牛磺酸+高劑量DFP均可以顯著增強(qiáng)Bcl-2的蛋白表達(dá)量(P＜0.05)，降低Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量（P＜0.05）。
　　在單獨(dú)用藥組的比較，?；撬?低劑量DFP組大鼠海馬的Bcl-2的蛋白表達(dá)量較?；撬峤M有顯著提升(P＜0.05)，而Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量顯著降低。與?；撬峤M以及高劑量DFP組相比，?；撬?高劑量D

18、FP可以顯著提高Bcl-2的蛋白表達(dá)量，明顯降低Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.DFP與?；撬崧?lián)合作用對染鋁大鼠皮層和血清抗氧化系統(tǒng)有顯著地保護(hù)作用。
　　2.DFP與?；撬崧?lián)合作用能夠有效地緩解鋁致大鼠皮層和全血ATP酶活力的降低。
　　3.DFP與?；撬崮軌蝻@著地調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的基因和蛋白表達(dá)，從而有效地拮抗鋁致海