?；撬釋逛X致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)細胞凋亡及過氧化損傷的保護作用.pdf

1、目的:
　　本實驗通過灌胃給予Wistar大鼠六水氯化鋁以建立鋁中毒模型并從治療和預防兩方面給予?；撬徇M行解毒。通過測定相關(guān)元素、過氧化指標、三磷酸腺苷酶（ATP酶）活力和細胞凋亡相關(guān)基因的表達，研究和探討牛磺酸對抗鋁致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)細胞凋亡及過氧化損傷的保護作用。
　　方法:
　　1.動物實驗
　　將60只健康雄性SPF級Wistar大鼠按體重(185-225g)隨機分為6個實驗組，分別為陰性對照組、鋁染毒組、牛

2、磺酸預防組以及牛磺酸低、中、高劑量組，每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，采用灌胃的方式進行給藥，每天灌胃1次，每周連續(xù)給藥5d。給予陰性對照組大鼠生理鹽水1mL/d，共8周;鋁染毒組、?；撬岬?、中、高劑量組及?；撬犷A防組前4周給予六水氯化鋁281.40mg/(kg·d)，其中預防組在給予六水氯化鋁4h后給予?；撬?00mg/(kg·d);后四周，給予鋁染毒組生理鹽水1 mL/d，?；撬岬?、中、高劑量組每日分別給予?；撬?00、400、800

3、 mg/kg，?；撬犷A防組每日灌胃劑量為400 mg/kg。
　　每組隨機抽取3只大鼠，采用4％多聚甲醛灌注，用于制作石蠟切片和免疫組化測定。剩余大鼠在染毒結(jié)束后禁食24h，斷頭取血，并迅速剖離出腦組織，于-20℃保存?zhèn)溆谩?br>　　2.?；撬釋︿X染毒大鼠一般生長發(fā)育狀況的影響
　　在動物實驗過程中，每日對各組大鼠的進食情況和行為變化進行觀察與記錄，每隔3日準確稱量各組大鼠體重并記錄，計算各階段體重增長變化值。各組大鼠在灌

4、胃結(jié)束后禁食24h，斷頭處死，于冰上迅速解剖分離出腦組織，準確稱重，并計算腦系數(shù)。研究?；撬嵩诟纳迫句X大鼠一般生長發(fā)育狀況方面的作用。
　　3.?；撬釋︿X染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的影響
　　在解離出大鼠腦組織后，準確稱重，按比例加入預冷的生理鹽水制成大鼠腦組織勻漿。各組大鼠腦組織丙二醛(MDA)含量的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法進行。二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法用于谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力值的相關(guān)測定，

5、而超氧化物歧化酶(SOD)的活力值測定則采用黃嘌呤氧化酶法進行，從而研究?；撬徂卓逛X致大鼠腦組織抗氧化損傷的作用。
　　4.?；撬釋︿X染毒大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響
　　各組大鼠斷頭取血后，收集血清。大鼠血清中的GSH-Px活力的測定采用DTNB法，黃嘌呤氧化酶法則用于測定血清中的SOD活力。大鼠血清中MDA含量則采用TBA法，從而研究?；撬釋︿X染毒大鼠血清抗氧化指標的改善作用。
　　5.?；撬釋︿X染毒大鼠腦組織中三種主

6、要ATP酶活力的影響
　　準確剖離并稱取各組大鼠腦組織，按比例加入預冷的生理鹽水制備成組織勻漿。各組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力、Na+ K+-ATP酶活力和Ca2+-ATP酶活力均采用無機磷法分別進行測定，研究牛磺酸對鋁致大鼠腦組織ATP酶活力下降的拮抗作用。
　　6.?；撬釋︿X染毒大鼠全血中三種主要ATP酶活力的影響
　　取各組大鼠的部分抗凝全血制成溶血液。全血中Mg2+-ATP酶活力、Na+K+-ATP酶活

7、力和Ca2+-ATP酶活力均采用無機磷法分別進行測定，研究?；撬釋︿X染毒大鼠全血ATP酶的保護作用。
　　7.?；撬釋︿X染毒大鼠血清中鋁及必需元素含量的影響
　　各組大鼠斷頭取血后，收集血清。采用火焰原子吸收光譜法對大鼠血清中鈣、鎂、銅、鐵、鋅元素的含量依次進行了測定。而血清中鋁元素含量的測定則采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法。研究?；撬釋θ句X大鼠血清中必需元素的影響及其排鋁效果。
　　8.牛磺酸對鋁染毒大鼠腦組織Bcl-2

8、和Bax蛋白表達的影響
　　染毒結(jié)束后，用4％多聚甲醛進行心臟灌注以固定大鼠腦組織，并制作石蠟切片。采用SABC免疫組化染色法測定各組大鼠腦組織Bcl-2和Bax蛋白的表達，研究?；撬釋θ句X致大鼠腦組織細胞凋亡的拮抗作用。
　　結(jié)果:
　　1.?；撬釋︿X染毒大鼠一般生長發(fā)育狀況的影響
　　染鋁組大鼠的生長發(fā)育較遲緩且出現(xiàn)萎靡現(xiàn)象，其他各組大鼠的發(fā)育狀況良好。從染毒第6周開始，鋁染毒組大鼠的體重增長值與陰性對照組比

9、較已出現(xiàn)顯著下降趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);染毒第8周時，?；撬犷A防組大鼠的體重增長較為明顯且已顯著高于鋁染毒組（P＜0.05）。陰性對照組和預防組大鼠的腦系數(shù)值與鋁染毒組相比顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.牛磺酸對鋁染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的影響
　　鋁染毒組大鼠腦組織GSH-Px活力和SOD活力與陰性對照組相比均呈現(xiàn)下降趨勢，而測定所得的MDA含量則顯著高于陰性對照，差異具有統(tǒng)計學意

10、義（P＜0.05）。
　　牛磺酸高劑量組及預防組大鼠腦組織中的SOD活力顯著高于鋁染毒組（P＜0.05），而MDA含量則顯著降低(P＜0.05);牛磺酸中劑量組、高劑量組及預防組大鼠腦組織中的GSH-Px活力值均呈現(xiàn)顯著升高趨勢(P＜0.05)。?；撬岣鹘M大鼠腦組織中的SOD活力、MDA含量和GSH-Px活力與陰性對照比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.?；撬釋︿X染毒大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響
　　鋁染毒

11、組大鼠血清中的MDA含量與陰性對照組進行比較，可觀察到顯著升高趨勢（P＜0.05），而GSH-Px活力則顯著低于陰性對照(P＜0.05)。
　　與鋁染毒組相比較，中、高劑量?；撬峤M和預防組大鼠血清中MDA的含量均呈現(xiàn)明顯降低趨勢，且中、高劑量組與之相比具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。中、高劑量?；撬峤M和預防組大鼠血清中的GSH-Px活力均明顯高于鋁染毒組，且中劑量組呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。各實驗組大鼠血清中的SOD活力測定

12、值之間進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4.?；撬釋︿X染毒大鼠腦組織中三種主要ATP酶活力的影響
　　鋁染毒組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力和Na+K+-ATP酶活力值均顯著低于陰性對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　中、高劑量?；撬峤M和預防組大鼠腦組織中Na+K+-ATP酶活力值明顯高于鋁染毒組，中、高劑量組與之相比呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異（P＜0.05）;與鋁染毒組相比較，中、高劑量?；撬?/p>

13、組和預防組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力值均有明顯升高趨勢，且高劑量組呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。而各組Ca2+-ATP酶活力值之間進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　5.牛磺酸對鋁染毒大鼠全血中三種主要ATP酶活力的影響
　　與陰性對照組相比，鋁暴露組大鼠全血中Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活力值顯著下降(P＜0.05)。
　　?；撬岣邉┝拷M和預防組大鼠全血中Ca2+-ATP酶活力值顯

14、著高于鋁暴露組(P＜0.05);所有牛磺酸實驗組大鼠全血Mg2+-ATP酶活力均高于鋁染毒組，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。大鼠全血Na+ K+-ATP酶活力值各組間進行比較，均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　6.?；撬釋︿X染毒大鼠血清中鋁及必需元素含量的影響
　　將測得的鋁暴露組大鼠血清中鋁元素含量與陰性對照組進行比較，結(jié)果呈現(xiàn)顯著升高趨勢（P＜0.05）。中劑量和高劑量?；撬峤M血清鋁含量則顯著降低（P＜0.05

15、）。
　　與陰性對照組相比，鋁染毒組大鼠血清中Fe含量顯著升高，而Mg、Zn含量則降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。測得?；撬岣邉┝拷M大鼠血清Fe含量顯著低于鋁染毒組（P＜0.05），而Zn含量則明顯升高，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。中劑量?；撬峤M與?；撬犷A防組大鼠血清Mg含量與鋁染毒組相比呈現(xiàn)上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組大鼠血清中Cu、Ca含量測定值分別進行組間比較，均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）

16、。
　　7.牛磺酸對鋁染毒大鼠腦組織Bcl-2和Bax蛋白表達的影響
　　由大鼠腦組織中Bcl-2蛋白表達的免疫組化染色結(jié)果可見，陰性對照組大多數(shù)細胞的胞體較大，細胞形狀并不規(guī)則，有的可觀察到細胞表面突起，陽性細胞的胞質(zhì)被染為棕黃色，且染色顏色較深，可明顯區(qū)別于未染色細胞。與陰性對照組相比，鋁染毒組陽性細胞數(shù)呈現(xiàn)一定程度的下降。而與鋁染毒組相比，?；撬岣鹘M陽性細胞數(shù)明顯增多，胞質(zhì)染色較深。
　　而大鼠腦組織Bax蛋白表

17、達免疫組化染色結(jié)果顯示，陰性對照組大多數(shù)細胞形狀規(guī)則，均勻分布，幾乎無陽性表達細胞。鋁染毒組多數(shù)細胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色，顏色較深，且可觀察到不規(guī)則突起，即陽性表達細胞數(shù)出現(xiàn)明顯增多。而牛磺酸各組染色細胞數(shù)均有減少，且中劑量和高劑量?；撬峤M陽性細胞數(shù)出現(xiàn)明顯降低趨勢，且著色較淺。
　　結(jié)論:
　　1.?；撬釋Υ笫蟮纳L發(fā)育有促進作用，一定程度上能夠改善鋁致大鼠發(fā)育遲緩現(xiàn)象。
　　2.?；撬釋θ句X大鼠腦組織和血清抗氧化系統(tǒng)有一