活菌H37Ra與滅活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討小鼠腹腔接種結(jié)核分枝桿菌活菌H37Ra、滅活菌H37Rv后的免疫物質(zhì)的表達(dá)差異，了解它們的免疫物質(zhì)的表達(dá)情況和相關(guān)的信號(hào)通路，探討活菌H37Ra及滅活菌H37Rv作為新的結(jié)核候選疫苗的可行性。
　　方法：1.分別培養(yǎng)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，用活菌H37Ra，滅活菌H37Rv感染10h后用抗酸染色方法，在顯微鏡下觀察各組巨噬細(xì)胞吞噬情況并計(jì)算兩種結(jié)核分枝桿菌的吞噬率。2.將活菌H37Ra，滅活菌H37Rv，生理鹽水分

2、別接種BALB/c小鼠腹腔，免疫30d后取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，RT-PCR法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞IL～12p40，TNF-a，IFN-γ，的基因轉(zhuǎn)錄水平；ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子IL-12p40，TNF-a，IFN-γ的表達(dá)；Griess法，化學(xué)法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO、H3O2水平；流式細(xì)胞儀檢測(cè)IFN-γ誘導(dǎo)的CD40L的變化情況。3.將活菌H37Ra，滅活菌H37Rv，生理鹽水分別接種BALB/c小鼠腹腔，免疫30d后取小鼠腹

3、腔巨噬細(xì)胞，用IFN-γ，刺激1天，用流式細(xì)胞儀，共聚焦及western檢測(cè)巨噬細(xì)胞表面CD40L的變化情況。
　　結(jié)果：1.巨噬細(xì)胞對(duì)活菌H37Ra和滅活菌H37Rv的吞噬率分別為(55.71±8.42)％，(14.82±2.12)％，與滅活菌相比，活菌H37Ra有更強(qiáng)的被吞噬能力(P<0.01)。2.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞被活菌H37Ra免疫后能顯著誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的IL-12P40、TNF及IFN-γ基因的轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞因子IL-12P4

4、0、TNF-a、TFN-γ、NO及H2O2高水平分泌：3.外源性細(xì)胞因子IFN-γ更能刺激活菌H37Ra誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表面CD40L的高表達(dá)。
　　結(jié)論：活的結(jié)核分枝桿菌減毒株H37Ra，能顯著誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生更多的保護(hù)性免疫物質(zhì)，有利于免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)，有可能作為新的結(jié)核候選疫苗，同時(shí)，IFN-γ是誘導(dǎo)刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要因子，而CD40L信號(hào)途徑是介導(dǎo)刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答的信號(hào)通路之一；IFN-γ