結(jié)核分枝桿菌H37Ra和有機(jī)硒聯(lián)合免疫效果的研究.pdf

1、目的： 1．探討結(jié)核分枝桿菌H37Ra與有機(jī)硒聯(lián)合免疫小鼠后，細(xì)菌在小鼠體內(nèi)定植的情況，以及誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫功能。 2．構(gòu)建可表達(dá)結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白 Ag85B的靶細(xì)胞，并研究結(jié)核分枝桿菌H37Ra 與有機(jī)硒聯(lián)合免疫小鼠后的特異性細(xì)胞毒作用及其免疫機(jī)制。 方法： 1．將C57BL/6小鼠分為6組(每組12只)，即(1)H37Ra+Se組、(2)BCG+Se組、(3)H37Ra組、(4)BCG

2、組、(5)Se組和(6)PBS對(duì)照組。小鼠連續(xù)灌服有機(jī)硒1周后，采用皮內(nèi)注射方式接種H37Ra或BCG，然后繼續(xù)喂硒4周。免疫4周和8周后，檢測(cè)小鼠臟器指數(shù)及結(jié)核桿菌在臟器內(nèi)的定植情況。 2．分離各組小鼠脾淋巴細(xì)胞，體外用 PPD刺激，MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)(Stimulation Index，SI)；ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-2的產(chǎn)量。 3．構(gòu)建可表達(dá)結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白Ag85B的靶細(xì)胞

3、，MTT 法檢測(cè)免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞的殺傷活性。 4．免疫8周后，RT-PCR法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞中穿孔素、顆粒酶BmRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1．免疫4周或8周后，H37Ra+Se組的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾肺荷菌量略高于BCG+Se組、H37Ra組，但差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 2．H37Ra+Se組的SI、IL-2和IFN-γ均顯著高于H37Ra組(P<0.05)，但與BCG+Se組相比，IFN-γ有顯著性

4、差異，其他指標(biāo)無(wú)顯著性差異(P>0.05)；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各項(xiàng)指標(biāo)均下降。 3．轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞中有結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白Ag85B的表達(dá)，H37Ra+Se組脾淋巴細(xì)胞的殺傷活性顯著高于H37Ra組(P<0.05)，略高于BCG+Se組(P>0.05)。 4．H37Ra+Se組小鼠穿孔素及顆粒酶B mRNA的表達(dá)量均顯著高于PBS組(P<0.05)，略高于BCG+Se組(P>0.05)；H37Ra+Se組與H37Ra組比較，

5、穿孔素mRNA的表達(dá)量有顯著性差異(P<0.05)，而顆粒酶BmRNA的表達(dá)量，前者略多于后者，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1．H37Ra和有機(jī)硒聯(lián)合免疫小鼠后結(jié)核菌能在小鼠脾臟、肺臟定植至少60天。 2．H37Ra 和有機(jī)硒聯(lián)合免疫小鼠后誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的細(xì)胞免疫效果顯著優(yōu)于H37Ra 或BCG單獨(dú)免疫，略優(yōu)于BCG和有機(jī)硒聯(lián)合免疫。 3．構(gòu)建表達(dá)結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白Ag85B的靶細(xì)胞及MTT