耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌耐藥機(jī)制及同源性分析.pdf

1、目的：對(duì)我院腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制進(jìn)行研究，及其同源性進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，旨在為我院預(yù)防和控制多重耐藥的腸桿菌科細(xì)菌感染及臨床指導(dǎo)用藥提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法：在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院篩選了2009年11月～2011年4月全部腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類抗生素不敏感的共34株。用Vitek2 Compact全自動(dòng)藥敏檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定、常規(guī)藥敏檢測(cè)及MIC值測(cè)定；先把產(chǎn)碳青霉烯酶菌株用改良Hodge實(shí)驗(yàn)做篩選；P

2、CR擴(kuò)增常見(jiàn)耐藥基因和Ompk35/36基因并進(jìn)行測(cè)序分析；細(xì)菌外膜蛋白是否缺失依靠SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)；PCR擴(kuò)增Int1、Int2和Int3整合酶基因；質(zhì)粒接合和消除試驗(yàn)研究細(xì)菌耐藥基因的傳播方式。ERIC-PCR對(duì)細(xì)菌進(jìn)行同源性分析。
　　結(jié)果：從1876株臨床腸桿科細(xì)菌中共檢測(cè)出34株，全部對(duì)厄他培南不敏感，合并對(duì)亞胺培南不敏感的有8株。19株細(xì)菌MHT陽(yáng)性。常見(jiàn)耐藥基因擴(kuò)增結(jié)果顯示，攜帶ESBLs耐藥基因的有3

3、0株，耐藥基因blaTEM、blaSHV、blaCTX－M－3和blaCTX－M－14都有陽(yáng)性菌株存在；各檢測(cè)出攜帶blaDHA和blaACT1兩種AmpC耐藥基因的細(xì)菌3株；8株攜帶blaIMP基因，14株攜帶blaOXA基因。5株肺炎克雷伯菌都攜帶Ompk35/36基因，不攜帶碳青霉烯酶基因的三株菌，Ompk35/36基因表達(dá)量下調(diào)。8株大腸埃希菌、1株陰溝腸桿菌和3株肺炎克雷伯菌有外膜缺失現(xiàn)象。27株菌Int1整合酶基因擴(kuò)增陽(yáng)性，

4、包括6株大腸埃希菌、17株陰溝腸桿菌和4株肺炎克雷伯菌。未擴(kuò)增出Int2和Int3整合酶基因。除骨科一株陰溝腸桿菌外，其余33株細(xì)菌質(zhì)粒消除和接合試驗(yàn)均成功。ERIC-PCR結(jié)果表明，12株大腸埃希菌分為3個(gè)基因型，17株陰溝腸桿菌分為6個(gè)基因型，5株肺炎克雷伯菌為一個(gè)基因型。
　　結(jié)論：厄他培南為底物的篩選產(chǎn)碳青霉烯酶菌株的效果優(yōu)于亞胺培南。我院耐藥菌所產(chǎn)碳青霉烯酶以金屬酶IMP-8和絲氨酸蛋白酶OXA-1為主，不產(chǎn)碳青霉烯酶的