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文檔簡介
1、目的:篩選耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的菌株,從基因水平研究碳青霉烯酶和外排泵基因在耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌中的作用,分析成都地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的同源性,為本地區(qū)醫(yī)院感染控制提供重要依據(jù)。
方法:1.收集成都地區(qū)臨床和醫(yī)院環(huán)境中分離的鮑曼不動桿菌復(fù)合群160株,通過多重PCR對其中的鮑曼不動桿菌進(jìn)行快速鑒定。2.采用瓊脂稀釋法檢測鮑曼不動桿菌對14種抗生素的耐藥性,篩選耐碳青霉烯類的鮑曼不動桿菌。3.通過多重PCR檢測耐
2、碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的苯唑西林類酶(OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58和OXA-143)和PCR法檢測金屬酶(NDM-1、IMP、VIM和SIM),同時通過PCR檢測插入序列ISAbal及其與OXA酶的關(guān)系。4.采用PCR檢測外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM,熒光定量PCR分別檢測對碳青霉烯類敏感和耐藥菌株外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM的表達(dá)情況。5.應(yīng)用DiversiLab系統(tǒng)分析整
3、個地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌的同源性。
結(jié)果:1.多重PCR結(jié)果顯示,在160株鮑曼不動桿菌復(fù)合群中有132株(132/160,82.5%)為鮑曼不動桿菌。2.132株鮑曼不動桿菌中篩選到79株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌,耐藥率為59.84%(79/132);藥敏結(jié)果顯示,79株CRAB對常用抗生素有較高耐藥率,其中對頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟,耐藥率分別為79.9%、84.8%,而其余抗生素耐藥率均大于90%。3.多重PCR
4、結(jié)果顯示,在79株CRAB菌株中均檢測到OXA-51和OXA-23,在20株碳青霉烯類敏感鮑曼不動桿菌中只檢測OXA-51,未檢測到OXA-23;僅有一株檢出IMP基因,其余碳青霉烯酶基因均未檢測到,提示產(chǎn)OXA-23基因可能是CRAB的主要耐藥機(jī)制之一;PCR結(jié)果顯示,在79株CRAB菌株中均檢測到ISAbal序列,同時在77株CRAB菌株中檢測到ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu),且通過測序比對發(fā)現(xiàn)ISAbal存在于OXA-23基因上游
5、;同時發(fā)現(xiàn)含有ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)的77株CRAB菌株對碳青霉烯類抗生素完全耐藥,而不含ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)的2株CRAB菌株對其中一種碳青霉烯類抗生素敏感,提示ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)可能與CRAB耐藥相關(guān)。4.PCR結(jié)果顯示,79株CRAB菌株擴(kuò)增外排泵基因AdeB、AdeJ和AbeM的陽性率分別為58.2%、96.2%和97.5%,20株敏感鮑曼不動桿菌擴(kuò)增外排泵AdeB、AdeJ和AbeM的陽性率分別為
6、25%、85%和95%,說明對碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動桿菌均可檢測到外排泵基因,提示外排泵基因表達(dá)及其表達(dá)調(diào)控可能與鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類耐藥有關(guān)。5.熒光定量PCR結(jié)果顯示,CRAB菌株的外排泵AdeJ基因表達(dá)量比CSAB菌株增加了5.59倍,而外排泵AdeB和AbeM表達(dá)量無明顯變化,提示AdeJ基因表達(dá)量的改變與CRAB的耐藥有關(guān)。6.DiversiLab系統(tǒng)將40株代表性CRAB菌株分為4個不同親緣關(guān)系的克隆組及9個亞克隆
7、組,其中克隆組1為最流行的克隆,且在5家醫(yī)院都有分布,提示CRAB克隆組1在整個地區(qū)存在播散的可能。
結(jié)論:1.通過分子生物學(xué)方法和瓊脂稀釋法藥敏試驗準(zhǔn)確篩選出CRAB菌株。2.整個成都地區(qū)鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素和其他常用抗生素耐藥廣泛,并存在多重耐藥的現(xiàn)象。3.鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素的一個主要機(jī)制是產(chǎn)生OXA-23酶,ISAbal存在于OXA-23基因上游,且ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)可能與CRAB耐藥相
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