α-磷酸葡萄糖變位酶基因pgm2的克隆表達(dá)及功能研究.pdf

1、分類號(hào)：Q78密級(jí)：不保密學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：12841007a磷酸葡萄糖變位酶基因pgm2的克隆表達(dá)及功能研究Cloning，ExpressionandFunctionStudiesofaPhosphoglucomutaseGeneapgm2專業(yè)名稱：指導(dǎo)教師姓名：研究生姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：論文課題來源：學(xué)位授予單位：生物化學(xué)與分子生物學(xué)王艷萍教授崔月倩理學(xué)碩士2015年03月國家自然科學(xué)基金天津科技大學(xué)摘要

2、本實(shí)驗(yàn)室前期從西藏Kefir粒中分離得到一株具有高產(chǎn)胞外多糖的馬奶酒樣乳桿菌ZW3，該菌具有良好的益生功能，在優(yōu)化的改良MRS培養(yǎng)基中，胞外多糖最高產(chǎn)量達(dá)2000mg／L以上，產(chǎn)生的胞外多糖具有較好的理化性質(zhì)，是一株可用于食品，醫(yī)藥等多種領(lǐng)域的菌株。本論文以馬奶酒樣乳桿菌ZW3為研究對(duì)象，通過前期對(duì)其全基因組測(cè)序，對(duì)得到的結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該菌株含有一個(gè)21lMb的環(huán)狀染色體以及兩個(gè)大小分別為194，769bp(pWWl)和46，296

3、bp(pWW2)的質(zhì)粒，還發(fā)現(xiàn)在馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體，有一段144kb的胞外多糖基因簇，攜帶17個(gè)多糖合成相關(guān)基因，及許多胞外多糖合成通路中的編碼胞外多糖代謝通路中代謝關(guān)鍵酶的管家基因pgm2，gaIEgalK等。為了研究馬奶酒樣乳桿菌ZW3的代謝通路，尋找高效胞外多糖產(chǎn)糖通路，以及構(gòu)建過表達(dá)菌株高產(chǎn)胞外多糖，以馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體為模板，利用設(shè)計(jì)的引物對(duì)代謝管家基因pgm2進(jìn)行了擴(kuò)增，構(gòu)建人腸桿菌重組質(zhì)粒pET30apgm

4、2，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，并成功進(jìn)行了表達(dá)。同時(shí)，構(gòu)建構(gòu)建了乳酸菌重組質(zhì)粒pMG36epgm2，轉(zhuǎn)化至馬奶酒樣乳桿菌ZW3菌株中，成功構(gòu)建了過表達(dá)菌株，并對(duì)馬奶酒樣乳桿菌ZW3野生菌以及其轉(zhuǎn)化菌株進(jìn)行生長(zhǎng)特性分析。針對(duì)已經(jīng)轉(zhuǎn)化成功的重組菌株，以野生菌馬奶酒樣乳桿菌ZW3為對(duì)照，利用苯酚硫酸法檢測(cè)兩者的胞外多糖產(chǎn)量，結(jié)果顯示胞外多糖產(chǎn)量提高了2016％。根據(jù)SDS—PAGE電泳圖譜可初步確定0【一磷酸葡萄糖變位酶基pgm2在大腸桿菌以及馬奶酒