白藜蘆醇及HIF-1α-VEGF-A通路對(duì)大鼠左肺移植術(shù)后移植肺的作用及機(jī)制探討.pdf

1、第一部分:改良套管吻合法建立同種異體大鼠左肺原位移植模型
　　目的:通過改良套管吻合法建立同種異體大鼠左肺原位移植模型，并繪制學(xué)習(xí)曲線，觀察肺移植模型存活率。
　　方法:將100只SD大鼠分為供體60只和受體40只兩組，先進(jìn)行20只供體手術(shù)及肺門套管的學(xué)習(xí)，再采用改良套管吻合技術(shù)完成大鼠左肺原位移植手術(shù)。
　　結(jié)果:20例供肺手術(shù)中，到開展到第15例時(shí)，供肺灌洗的質(zhì)量基本都是令人滿意的，40例肺移植手術(shù)中，到開展到第2

2、5例時(shí)，受體手術(shù)時(shí)間才逐漸穩(wěn)定;供體手術(shù)時(shí)間為9.28±2.01分鐘，供肺肺門游離時(shí)間為6.04±1.43，供肺套管時(shí)間為5.70±2.36，受體手術(shù)時(shí)間為33.40±8.44，冷缺血時(shí)間為26.37±6.01，熱缺血時(shí)間為16.29±3.58;所有肺移植手術(shù)的成功率為51.61％，手術(shù)技術(shù)掌握后的手術(shù)成功率達(dá)到80％左右。
　　結(jié)論:改良套管吻合法建立的同種異體大鼠左肺原位移植模型可重復(fù)性高。通過對(duì)套管吻合操作細(xì)節(jié)的改良，降低了

3、肺移植受體手術(shù)的難度，明顯縮短了學(xué)習(xí)周期。
　　第二部分:白藜蘆醇對(duì)大鼠左肺移植術(shù)后急性期移植肺的保護(hù)作用和相關(guān)機(jī)制
　　目的:白藜蘆醇是一個(gè)多功能的生物活性物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)它有抗炎效果，在預(yù)防器官的缺血再灌注損傷也有明顯作用。但目前尚無報(bào)道白藜蘆醇對(duì)肺移植供肺是否存在保護(hù)作用。本研究通過比較不同處理?xiàng)l件下肺移植后早期的大鼠全身及局部炎癥表現(xiàn)，以及肺組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，來研究白藜蘆醇對(duì)大鼠同種異體左肺移植術(shù)后移植肺的作用

4、及機(jī)理。
　　方法:我們將SD大鼠分為白藜蘆醇組(RES組)、地塞米松組（DEM組）和生理鹽水組(NS組)，分別于術(shù)前1小時(shí)予受體腹腔注射白藜蘆醇混懸液(60mg/kg)、地塞米松（1mg/kg）和生理鹽水(2ml/kg)，并進(jìn)行左肺原位移植后使之存活24小時(shí)，我們檢測(cè)受體血清和肺泡灌洗液的細(xì)胞因子濃度。行HE染色觀察雙側(cè)肺的組織結(jié)構(gòu)，對(duì)肺組織的損傷程度進(jìn)行評(píng)分。并且用免疫組化染色檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子-κB

5、P65、受體互作絲氨酸/蘇氨酸激酶3（RIPK3）和混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域蛋白(MLKL)的表達(dá)。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)NS組移植肺組織鏡下較嚴(yán)重的肺泡上皮水腫增厚、呼吸性支氣管內(nèi)和肺間質(zhì)有大量紅細(xì)胞伴肺間質(zhì)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、局部見肺不張表現(xiàn);RES組和DEM組移植肺組織鏡下表現(xiàn)較為相似，炎癥表現(xiàn)較NS組輕，肺泡結(jié)構(gòu)基本正常、局部肺泡腔內(nèi)可見紅細(xì)胞，肺間質(zhì)中少量中性粒細(xì)胞和紅細(xì)胞。ELISA結(jié)果顯示:RES組移植肺肺泡灌洗液及血清中IL-

6、6、TNF-α水平較NS組均有不同程度下降，抗炎效果與DEM組相似，IL-10濃度較NS組無明顯差異。RES組的i-NOS、RIPK3和MLKL的高表達(dá)的比例約為50％、50％和37.5％，分別都低于NS組的水平，并且肺組織損傷程度和程序性壞死相關(guān)蛋白表達(dá)陽性率呈反比。
　　結(jié)論:根據(jù)上述研究，我們認(rèn)為通過建立同種異體大鼠左肺原位移植模型，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)肺移植術(shù)后早期移植肺組織結(jié)構(gòu)存在一定的保護(hù)作用。并且我們發(fā)現(xiàn)移植肺組織損

7、傷和程序性壞死相關(guān)蛋白的表達(dá)的關(guān)系，提示肺移植相關(guān)缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)理可能與細(xì)胞程序性壞死有關(guān)。
　　第三部分:HIF-1α-VEGF-A通路的激活在肺移植后慢性排斥反應(yīng)中的作用
　　目的:低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)在低氧狀態(tài)下發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性，很多研究表明器官移植后移植物長(zhǎng)期處于缺氧狀態(tài)，導(dǎo)致移植物功能受到影響。我們假設(shè)肺移植后慢性閉塞性細(xì)支氣管炎與HIF-1α有關(guān)。本研究比較HIF-1α及其下游靶基因血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因

8、子(VEGF)A等在同種及異種肺移植大鼠肺組織中的表達(dá)情況，研究該通路與大鼠肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎(BO)的關(guān)系。
　　方法:我們采用袖套吻合法建立大鼠左肺原位移植模型，實(shí)驗(yàn)組是由F344的左肺移植給Lewis大鼠;術(shù)后予環(huán)孢菌素抗急性排異，LPS刺激誘導(dǎo)BO;于術(shù)后第90天處死取肺。行HE染色和Masson染色觀察移植肺的組織結(jié)構(gòu)，評(píng)估肺纖維化評(píng)分，免疫組化檢測(cè)HIF-1α、VEGF-A和VEGF受體蛋白-2(VEGFR-2)

9、在移植肺組織中的表達(dá)水平，分析HIF-1α表達(dá)與VEGF-A及VEGFR-2間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:動(dòng)物模型術(shù)后影像學(xué)及病理學(xué)資料均提示該動(dòng)物模型在術(shù)后90天時(shí)發(fā)生了閉塞性細(xì)支氣管炎。異種移植物HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2術(shù)后表達(dá)陽性率為77.27、63.64和68.18％，明顯高于同種移植。肺組織纖維化程度在異種移植物中分?jǐn)?shù)最高，明顯高于其余組，p＜0.01;并且與HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2蛋白表達(dá)