血紅素加氧酶-1在大鼠肺移植中的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分:大鼠同種異體原位肺移植模型的建立 目的:改進(jìn)手術(shù)方式，建立一種更為簡單有效的大鼠左肺原位移植模型。 方法:將雄性Wister和SD大鼠隨機(jī)分為供體、受體兩組，SD大鼠作為供體，Wister大鼠作為受體，采用經(jīng)下腔靜脈灌注和供肺原位切除，血管翻轉(zhuǎn)改良的套管吻合技術(shù)完成供受體吻合。 結(jié)論:本研究應(yīng)用的改良的手術(shù)方式是一種簡單、有效、實(shí)用的方法，可相對(duì)簡捷有效地建立大鼠左肺原位移植模型。 第二部:分血

2、紅素加氧酶-1(HO-1)與供肺缺血再灌注損傷 目的:研究血紅素加氧酶-1與供肺缺血再灌注之間的關(guān)系。 方法:在大鼠左肺原位移植模型的基礎(chǔ)上，采用鈷原卟啉(CobaltprotoporphyrinCoPP)HO-1最常用的誘導(dǎo)劑和鋅原卟啉(ZincprotoporphyrinZnPP)HO-1的抑制劑來調(diào)節(jié)HO-1的表達(dá)。將同系SD大鼠隨機(jī)分為三組：(1)對(duì)照組：供體術(shù)前24小時(shí)腹腔注射生理鹽水；(2)CoPP組：供體術(shù)

3、前24小時(shí)腹腔注射CoPP(5mg/kg)；(3)ZnPP組：供體術(shù)前24小時(shí)腹腔注射ZnPP(10mg/kg)。分別在再灌注后1h、2h、4h、8h、12h時(shí)間點(diǎn)取標(biāo)本，快速剪取移植肺臟，切成兩半，一半用液氮速凍保存；另一半用10％濃度的甲醛固定，石蠟包埋。運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測HO-1蛋白在供肺組織中的表達(dá)情況；用TUNEL技術(shù)檢測供肺中細(xì)胞凋亡的情況；用RT-PCR技術(shù)檢測供肺中HO-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)論:細(xì)胞凋亡參

4、與了肺移植后缺血再灌注損傷，細(xì)胞凋亡與再灌注時(shí)間呈動(dòng)態(tài)變化，它是發(fā)生在肺移植術(shù)后早期的事件。供肺CoPP術(shù)前預(yù)處理可以誘導(dǎo)HO-1表達(dá)上調(diào)，HO-1過表達(dá)可以抑制肺移植缺血再灌注后出現(xiàn)的肺細(xì)胞凋亡，從而減輕供肺再灌注損傷。 第三部:分血紅素加氧酶-1(HO-1)與肺移植急性排斥反應(yīng) 目的:研究血紅素加氧酶-1在肺移植急性排斥反應(yīng)中的作用以及機(jī)制。 方法:;建立大鼠同種異體原位肺移植模型，采用CoPP作為HO-1的誘

5、導(dǎo)劑、采用ZnPP作為HO-1的抑制劑，調(diào)節(jié)HO-1的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為三組：對(duì)照組、CoPP組和ZnPP組；供體術(shù)前24小時(shí)腹腔分別注射生理鹽水、CoPP和ZnPP。每天觀察移植肺的功能狀態(tài)，于肺移植術(shù)后不同天數(shù)分別切取供肺，即術(shù)后3、6、9、12天留取標(biāo)本。HE染色觀察移植肺的排斥反應(yīng)程度和級(jí)別；運(yùn)用免疫組化技術(shù)定性判斷HO-1蛋白在移植肺中的表達(dá)情況；western-blot定量檢測HO-1蛋白在移植肺組織中的表達(dá)。 結(jié)論:H