人源microRNA分子表達(dá)庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、目的:研究表明，細(xì)胞內(nèi)不僅存在著mRNA分子，還存在著大量的非編碼RNA分子，它們不編碼蛋白質(zhì)，但參與基因表達(dá)的調(diào)控。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的miRNA(microRNA)就是其中一種有重要功能的非編碼RNA分子，miRNA廣泛的參與機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育和疾病發(fā)生等各種生命過(guò)程。雖然在各種生物中已發(fā)現(xiàn)了數(shù)百條miRNA基因，但對(duì)它們的功能還知之甚少，為了深入研究miRNA在人類(lèi)細(xì)胞中的作用，構(gòu)建了人源miRNA表達(dá)載體的miRNA分子表達(dá)庫(kù)。

2、方法:依據(jù)Sanger miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的miRNA序列設(shè)計(jì)引物，從HepG2細(xì)胞基因組上擴(kuò)增含有miRNA前體的目的片段，克隆進(jìn)真核表達(dá)載體，采用Northern blot及雙熒光素酶分析技術(shù)進(jìn)行表達(dá)及功能驗(yàn)證。 結(jié)果:共構(gòu)建了包括207條人源miRNA表達(dá)載體的miRNA分子表達(dá)庫(kù)，隨機(jī)挑選pmiR-16，pmiR-24，pmiR-125a：進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)它們都可以在HEK293細(xì)胞中表達(dá)成熟的miRNA分子，