肝癌中HLA I類分子表達上調(diào)的分子機制研究.pdf

1、腫瘤的早期，機體的免疫功能通常處于正常狀態(tài)。由于HLA基因控制著T細胞及NK細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中心分子的表達，腫瘤細胞往往“借用”各種HLA Ⅰ類分子下調(diào)或缺失的表型以逃避機體的免疫監(jiān)視。 本實驗室近幾年以肝癌高發(fā)的江蘇啟東地區(qū)為研究現(xiàn)場。通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)在165例肝癌組織較癌旁組織中，除了LMP2分子之外，HLA Ⅰ類各分子均有不同程度的上調(diào)，其中以HLA Ⅰ類分子A位點上調(diào)最明顯(54％)。新鮮收取的36例肝癌和癌旁

2、組織中，RT-PCR．及Western Blot的結(jié)果也進一步證實肝癌中HLA Ⅰ類及相關(guān)分子上調(diào)趨勢的存在，而且HLA Ⅰ類分子的異常表達在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上存在顯著相關(guān)性，由此推測肝癌中HLA Ⅰ類分子異常表達的調(diào)控可能發(fā)生在相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄之前。此外還發(fā)現(xiàn)肝癌中存在HLA Ⅰ類各分子表達一致，多例組織中HLA Ⅰ類各分子的表達同時上調(diào)的表型。提示在肝癌中可能存在某一種上游分子誘導(dǎo)所有HLA Ⅰ類相關(guān)分子同時表達增加。 本研究

3、以肝癌細胞系為模型，從轉(zhuǎn)錄水平研究HLA Ⅰ類分子表達上調(diào)可能存在的機制。探尋可能引起肝癌組織中HLA Ⅰ類各分子同時上調(diào)的上游刺激分子。分析肝癌HLA Ⅰ類分子表達上調(diào)可能的意義。 研究結(jié)果表明： 一、選用相對低表達HLA Ⅰ類分子的肝癌細胞系BEL7405為對照，以高表達HLA Ⅰ類分子的肝癌細胞系QGY7701和BEL7402為研究對象。HLA-A重鏈分子在轉(zhuǎn)錄水平的增加是引起這兩株肝癌細胞系HLA Ⅰ類分子表達上調(diào)

4、的關(guān)鍵因素，而其它抗原加工遞呈分子改變不明顯。進一步研究發(fā)現(xiàn)在這兩株肝癌細胞系中，HLA-A啟動子區(qū)域無序列改變。熒光素酶實驗提示順式作用序列ISRE、enhA在肝癌細胞系QGY7701和BEL7402中轉(zhuǎn)錄活性增高是介導(dǎo)HLA-A重鏈表達增加的重要因素。EMSA、RT-PCR及Western Blot也顯示與ISRE、enhA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子IRF-1及核內(nèi)1965在QGY7701和BEL7402中表達增加。細胞轉(zhuǎn)染實驗進一步證實IRF

5、-1及核內(nèi)065與HLA-A重鏈表達增加之間的因果關(guān)系。二者均可增加HLA-A的表達量，但p65作用更為顯著，而且存在疊加作用。同時，在肝癌組織中也檢測到相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子IRE-1和核內(nèi)p65與HLA-A重鏈的協(xié)同上調(diào)。提示這兩種分子在肝癌HLA Ⅰ類分子表達增加中起重要作用。但這兩類因子活化的信號刺激來源以及與HBV感染的相關(guān)性還需要進一步研究。 二、免疫組織化學(xué)方法和RT-PCR方法檢測肝癌組織標本中HLA Ⅰ類分子與PML間的

6、關(guān)系，以期尋找到可能引起肝癌組織中HLA Ⅰ類各分子同時上調(diào)的上游刺激分子。結(jié)果提示：PML與HLA重鏈表達上調(diào)存在顯著相關(guān)性(x<'2>=5.587，P<0.05)，推測PML可能是影響HLA上調(diào)的因素之一。以肝癌細胞系QGY-7701及BEL-7405為模型，研究發(fā)現(xiàn)在高表達HLAⅠ類分子復(fù)合物的細胞系QGY-7701中，其PML的含量也較BEL-7405多。外源性將PMLIV轉(zhuǎn)染入低表達HLAⅠ類分子復(fù)合物的細胞系BEL-7405

7、中，可使BEL-7405中與HLA Ⅰ類分子相關(guān)的基因均有增加，其中TAP、LMP等加工遞呈分子有明顯改變，也可使遞呈到細胞表面的HLA Ⅰ類分子復(fù)合物略有增加。結(jié)果提示PML可能是影響肝癌HLA Ⅰ類分子上調(diào)的因素之一。但其通過何種機制調(diào)節(jié)APM各因子的增加還需要進一步研究。 三、應(yīng)用MTT法檢測NK92細胞系對表達不同量HLAⅠ類分子的肝癌細胞系BEL-7405，QGY-7701的殺傷活性的影響。轉(zhuǎn)染p65入低表達HLA Ⅰ

8、類分子的細胞系BEL-7405后，細胞總HLA-A增加、細胞表面HLA Ⅰ分子復(fù)合物表達增加，可使NK92對其殺傷明顯受到抑制。肝癌中高表達HLA Ⅰ類分子，抑制NK細胞的殺傷，可能是肝癌逃避免疫監(jiān)視的機制之一。 以上研究結(jié)果提示與HLA-A啟動子區(qū)域順式作用序列ISRE、enhA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子IRF-1和1965表達增多是引起肝癌細胞系HLA Ⅰ類分子表達上調(diào)的關(guān)鍵因素。這也是肝癌組織中HLA Ⅰ類分子增加的重要分子機制。肝癌