肝癌中HLA I類及相關(guān)分子表達(dá)研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)病機(jī)制和機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)一直是腫瘤免疫研究熱點(diǎn)。人類白細(xì)胞抗原 (HLA) 在抗原遞呈及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其中腫瘤細(xì)胞 HLA I 類分子表達(dá)下調(diào)或丟失是腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體免疫監(jiān)視的重要機(jī)制之一。研究已發(fā)現(xiàn)在頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、前列腺癌和黑色素瘤中存在不同程度的HLA I類分子表達(dá)的降低和缺失。本研究探討了肝癌組織標(biāo)本中HLA I類分子相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)情況，并

2、分析它們與臨床資料問(wèn)的關(guān)聯(lián)性。為研究肝癌中HLA I類及相關(guān)分子的異常表達(dá)機(jī)制提供理論依據(jù)；同時(shí)還分析了肝癌細(xì)胞株中 DNA 甲基化與HLA I類分子異常表達(dá)的相關(guān)性。 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)新鮮收取的肝癌和癌旁組織標(biāo)本中HLAI類及相關(guān)加工分子基因表達(dá)情況；用HLA分子相關(guān)單抗，采用 Western Blot 及免疫組化技術(shù)檢測(cè)肝癌組織中HLAI類分子重鏈蛋白及HLAI類分子復(fù)合物的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)分析各相關(guān)基因和分子表達(dá)

3、之間的關(guān)聯(lián)性及其與臨床資料的相關(guān)性。采用 MSp 技術(shù)對(duì) 8 株肝癌細(xì)胞系和l株肝癌癌旁細(xì)胞系的 HLA I類分子重鏈A、B、C位點(diǎn)啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析。 研究結(jié)果表明：應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì) 36 例新鮮肝癌組織及相對(duì)應(yīng)癌旁組織中HLA-A、HLA-B、HLA-C、2βm、TAP-l、TAP-2、Tapasin的基因表達(dá)進(jìn)行分析，癌與癌旁相比較(T/N)，各基因的表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，在研究的標(biāo)本中上調(diào)率

4、分別為：47﹪、47﹪、53﹪、36﹪、44﹪、47﹪、28﹪，且各基因表達(dá)有顯著的相關(guān)性 (x2=17.63，p=O.1274)。應(yīng)用精確概率統(tǒng)計(jì)法與臨床資料相比較顯示各基因表達(dá)上調(diào)與病人年齡、腫瘤大小、病理分級(jí)、是否感染乙肝病毒及丙肝病毒無(wú)顯著相關(guān)性。進(jìn)一步用Western Blot及免疫組化技術(shù)分析肝癌組織及相對(duì)應(yīng)癌旁組織中HLA I類分子重鏈蛋白HLA-A、HLA-B/C及HLA I類分子復(fù)合物的表達(dá)，其表達(dá)上調(diào)趨勢(shì)依然明顯。上

5、調(diào)率分別為：．47﹪、42﹪、43﹪。用spearman等級(jí)相關(guān)分析，HLAI類復(fù)合物和相關(guān)基因的表達(dá)有顯著相關(guān)性 (p<0.05)。 在 8 株肝癌細(xì)胞系中HLA I類分子重鏈A、C位點(diǎn)啟動(dòng)子區(qū)域 CpG 島存在甲基化：將啟動(dòng)子區(qū)域的DNA 甲基化與相關(guān)基因表達(dá)數(shù)據(jù)相比較顯示二者沒(méi)有關(guān)聯(lián)性；在RNA干擾DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3a或3b的肝癌細(xì)胞系 SMMC7721 中，比較基因干擾前后 HLA I 類分子重鏈蛋白表達(dá)無(wú)顯著變化

6、。 以上研究結(jié)果提示：在肝癌組織中HLA I類分子存在著不同于其它腫瘤的異常表達(dá)模式，表達(dá)上調(diào)的比率較高。在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)肝癌中HLA I類分子重鏈、輕鏈及相關(guān)加工分子基因的研究顯示其表達(dá)較之癌旁有顯著上調(diào)趨勢(shì)，各基因表達(dá)呈高度相關(guān)性。對(duì)HLA I類分子復(fù)合物及重鏈蛋白的研究進(jìn)一步證實(shí)肝癌中HLA I類分子上調(diào)趨勢(shì)的存在，且HLA I類分子異常表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上存在顯著的相關(guān)性，岡此推測(cè)肝癌中對(duì)HLA I類分子異常表達(dá)的