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1、該研究設(shè)計(jì)以CⅡTAmRNA為模板的反義cDNA片段,從CⅡTA基因5'端第94位到500位核苷酸段設(shè)計(jì)引物,目的片段407bp,覆蓋第116和188位兩個(gè)AUG密碼子,也包含了第一外顯子和第二外顯子間的剪接位點(diǎn);用常規(guī)分子生物學(xué)方法構(gòu)建了反義片段的腺病毒表達(dá)載體(pAdEasy-1系統(tǒng));腺病毒載體經(jīng)HEK293細(xì)胞包裝產(chǎn)生含反義片段的重組腺病毒,用氯化銫密度梯度離心法獲得純化的高滴度腺病毒;進(jìn)行體外基因轉(zhuǎn)移,分別用反義片段真核表達(dá)載
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