真鯛脂肪酶基因的擴(kuò)增及同源重組載體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、青島海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文真鯛脂肪酶基因的擴(kuò)增及同源重組載體的構(gòu)建姓名：徐美瑜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：戴繼勛陳松林2002.6.1AmpIificatiorlofpagrUSmajor＼ipasefragmentandconstruotionofhomoIogousrecombinatiORvectorAbstractPositive—negativeselectiongenetargetingvectorhasbee

2、nwidelyusedingeneknock—outexperimentOMrresearchmainJyfocusesonthePagrusmajorLipaseknock—outwiththisselectivestrategyUptonowwehaveamplifieda4kblipaselongfragmentanda12kblipaseshortfragmentseparatelywithPCRmethodEScellgeno

3、meDNAiSusedasPCRtemplate，ByDNAsequencinganalysis，thetwolipasefragmentshavebeenverifiedtobevalidforgenetargetingThroughordinarygenecloningtechniques，thepositiveselectivegeneneogeneandnegativeselectivegeneGANCgeneareinsert

4、edintothelipasehomologousvectorneogeneiSlocatedinthemiddleoftwofragments，whileG爿ⅣCgeneiSlocatedatthe3、endof4kbfragmentThusapositivenegativeselectionvectorforPagrusmaforLipaseknockouthasbeenconstructedsuccessfullyFurtherm

5、ore，wevalidatetheusabilityofthevectorThetraditionalcalciumphosphateCOtransfectioniSusedforlinearizedgenetotransferintoEScellsThenG418andGANCselectiveculturesareusedfortheselectionofhomologousrecombinationcellsfromwholece

6、llsThewholeprocesshaspassedfor2weeksIncontrasttothecontrolgroupthatiStransfectedbutwithordinaryculturethefirstgroupwithouttrailsfectionbuttreatedwithG418culturealmostdiesoutthesecondwithtransfectionandtreatedwithG418cult

7、urehaspartlysurvived，thethirdgrcupwithtransfectionandtreatedwithG418andGANCculturehasmostdiedTheresultsshowthattheG418andGANCselectivecultureshaveeffectivelyenrichedthehomologousrecombinationEScellsKeywords：PagrusmajorLi

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