洋蔥假單胞菌G63脂肪酶產(chǎn)酶條件優(yōu)化及同源高效表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、從武漢、襄樊和長(zhǎng)沙等地采集含油污土樣90份，經(jīng)平板粗篩、搖瓶復(fù)篩，得到酶活力在5.0U/mL以上菌株4株，其中洋蔥假單胞菌（Pseudomonas cepacia）G63酶活最高，達(dá)到15.5U/mL。 應(yīng)用單因子試驗(yàn)（Monofactorial Experiment）和正交實(shí)驗(yàn)（Orthogonal test）對(duì)Pseudomonas cepacia G63產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵條件進(jìn)行了快速優(yōu)化。首先應(yīng)用單因子試驗(yàn)確定Pseudomo

2、nas cepacia G63產(chǎn)脂肪酶最適碳源和最適氮源分別為：葡萄糖和酵母提取物。在此基礎(chǔ)上通過考察3個(gè)因數(shù)（A：葡萄糖，B：酵母提取物，C：橄欖油）, 每個(gè)因素均取3個(gè)水平, 選用正交表L9 (34) 進(jìn)行試驗(yàn)。得到較為合適的培養(yǎng)基組成。最后通過單因子試驗(yàn)確定最適發(fā)酵溫度和最適起始pH。得到優(yōu)化培養(yǎng)條件為：酵母提取物2％，葡萄糖 0.5％，K2HPO4 0.3％, MgSO4 0.05％，起始pH7.5,在28℃培養(yǎng)60h后，酶活達(dá)

3、到45.23U/mL。與初始相比，酶活提高了2.66倍。 在此基礎(chǔ)上研究了Pseudomonas cepacia G63脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)。酶的最適pH和溫度分別為9.0和70℃，在pH5.0～9.5和70℃以下穩(wěn)定。同時(shí)酶對(duì)檢測(cè)的各短鏈醇有著非常好的穩(wěn)定性。 隨后本研究運(yùn)用PCR的方法從高產(chǎn)脂肪酶的洋蔥假單胞菌（Pseudomonas cepacia）G63克隆了脂肪酶基因及其伴侶基因。該脂肪酶基因開放式閱讀框（ORF）

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