4-羥基壬烯醛(4-HNE)誘導(dǎo)角膜上皮氧化應(yīng)激作用及機(jī)制研究.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范( 試行) 》。另外，該學(xué)位論文為( 廈門大學(xué)眼科研究所周躍平) 課題( 組)的研究成果，獲得( 周躍平) 課題( 組) 經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在( 廈門大學(xué)眼科研究所) 實(shí)驗(yàn)室完成。( 請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室

2、名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)聲明人( 簽名) ： 他’鈔l 歹年鄉(xiāng)月f 7 日摘要目的：4 一羥基壬烯醛( 4 ．H N E ) 是一種內(nèi)源性臘質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，來(lái)源于組織和細(xì)胞中0 ) 一6 多不飽和脂肪酸( P U F A s ) 的脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。既往研究提示4 ．H N E參與了多種氧化應(yīng)激相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展，其中包括眼部疾病。本課題通過(guò)體外細(xì)胞及體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究4 ．羥基壬烯醛( 4 ．H N E ) 誘導(dǎo)角膜

3、上皮氧化應(yīng)激作用及機(jī)制。方法：以人角膜上皮細(xì)胞系H C E 為細(xì)胞模型，通過(guò)C C K 8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度4 ．H N E 對(duì)人角膜上皮細(xì)胞活性的影響。利用4 ．H N E 處理細(xì)胞后，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)R O S 水平，并利用免疫熒光染色和免疫印跡方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激標(biāo)志物3 ．硝基酪氨酸( 3 - N T ) 與R o S 生成酶N A D P H 氧化酶4 ( N O x 4 ) 表達(dá)水平、以及細(xì)胞K e a p l ．

4、№曉．A R E 抗氧化信號(hào)通路激活情況與抗氧化酶C a t a l a s e 表達(dá)水平。利用經(jīng)典抗氧化劑N ．乙酰半胱氨酸( N A C ) 拮抗4 ．H N E 從而驗(yàn)證4 ．H N E 誘導(dǎo)角膜上皮氧化應(yīng)激作用。以w i s t a r 大鼠為動(dòng)物模型，予4 ．H N E 點(diǎn)眼處理，通過(guò)裂隙燈照相及H ＆E 染色方法檢測(cè)大鼠角膜上皮形態(tài)與組織學(xué)變化，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量P C R ( q R T ．P C R ) 、免疫熒光染色、免

5、疫印跡等方法檢測(cè)大鼠角膜上皮氧化應(yīng)激水平及細(xì)胞內(nèi)抗氧化轉(zhuǎn)錄因子N 咆激活情況及下游抗氧化酶基因表達(dá)水平。結(jié)果：高濃度4 ．H N E 對(duì)細(xì)胞活性具有明顯抑制作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。4 一H N E 誘導(dǎo)H C E 細(xì)胞中I 的S 生成增多以及3 - N T 表達(dá)增強(qiáng)。4 ．H N E 上調(diào)H C E 細(xì)胞中R O S 生成酶N O X 4 和抗氧化酶C a t a l a s e 的表達(dá)。4 ．H N E 誘導(dǎo)H C E 細(xì)胞抗氧化轉(zhuǎn)錄

6、因子N r f 2 的激活以及上調(diào)通路下游抗氧化酶N Q O l 的表達(dá)。N A C 能夠拮抗4 一H N E 誘導(dǎo)的H C E 細(xì)胞活性降低、3 ．N T 表達(dá)增強(qiáng)、N O X 4 表達(dá)上調(diào)以及N r f 2 的激活。4 ．H N E短期點(diǎn)眼后大鼠角膜上皮形態(tài)未見(jiàn)明顯異常，4 ．H N E 誘導(dǎo)大鼠角膜上皮中3 - N T表達(dá)增強(qiáng)。4 ．H N E 上調(diào)大鼠角膜上皮中N O X 4 的表達(dá)。4 ．H N E 激活大鼠角膜上皮抗氧化轉(zhuǎn)錄