構(gòu)建小鼠卵巢早衰模型研究p204在卵泡發(fā)育中的作用.pdf

1、干擾素(IFN)誘導(dǎo)蛋白在干擾素生物學(xué)功能的發(fā)揮中起著至關(guān)重要的作用，p204是干擾素誘導(dǎo)蛋白p200家族(IFI200)鼠類蛋白成員，該蛋白能與多種蛋白相互作用，并通過(guò)這些相互作用發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、阻斷細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞分化及感應(yīng)外源雙鏈DNA入侵等重要作用。
　　本論文用D-半乳糖注射法對(duì)遺傳背景相同的全身性p204基因敲除型(K0)小鼠和野生型(WT)小鼠進(jìn)行卵巢早衰模型的構(gòu)建，觀察小鼠造模過(guò)程中的健康狀況。造模八周后組織切

2、片染色觀察卵巢卵泡的發(fā)育的狀況。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清睪酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(HL)水平。采用real-timePCR技術(shù)對(duì)卵巢組織c-myc、Bc卜2、Bax、CYP17A1、CYP19A1等基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)與分析。采用免疫組化法檢測(cè)Bc卜2、CYP17A1、CYP19A1蛋白在小鼠卵巢組織的表達(dá)和分布情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在造模過(guò)程中，KO小鼠的體重及卵巢重量均顯著下降(p＜0

3、.01)，而WT小鼠變化不顯著，說(shuō)明p204敲除使小鼠對(duì)D-半乳糖代謝紊亂導(dǎo)致的生理功能變化的影響更大。通過(guò)對(duì)卵巢組織的切片及染色觀察發(fā)現(xiàn)KO小鼠卵巢閉鎖卵泡和黃體增多，顆粒細(xì)胞排列稀疏，說(shuō)明p204敲除對(duì)小鼠卵巢卵泡的發(fā)育產(chǎn)生了一定影響。對(duì)小鼠血清激素水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KO小鼠睪酮(T)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)水平均顯著升高(p＜0.01)。說(shuō)明p204基因敲除后使小鼠體內(nèi)的激素水平發(fā)生改變，導(dǎo)致卵泡發(fā)育功能下降，致使卵巢

4、損傷。對(duì)小鼠卵巢相關(guān)基因檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)KO小鼠凋亡相關(guān)基因bax、原癌基因c-myc表達(dá)水平均顯著升高(p＜0.01)，說(shuō)明p204敲除對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡產(chǎn)生影響，加速了卵巢早衰。還發(fā)現(xiàn)KO小鼠中性激素合成相關(guān)基因CYP17A1表達(dá)水平顯著升高(p＜0.01)，CYP19A1基因表達(dá)水平均顯著降低(p＜0.01)，說(shuō)明p204敲除使小鼠體內(nèi)性激素尤其是雄激素表達(dá)水平發(fā)生改變，導(dǎo)致小鼠卵泡發(fā)育發(fā)生障礙，形成卵巢早衰。免疫組化結(jié)果顯示缺失

5、p204導(dǎo)致小鼠卵巢內(nèi)Bcl-2、CYP17A1、CYP19A1蛋白的表達(dá)和分布發(fā)生改變，加速卵巢早衰形成。
　　以上結(jié)果表明p204在小鼠卵巢卵泡發(fā)育中可能通過(guò)調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖和凋亡的過(guò)程從而抵制卵巢早衰的形成。本論文為初步探究p204在小鼠POF卵泡發(fā)育中的作用，為進(jìn)一步闡明卵巢早衰卵泡發(fā)育障礙的發(fā)病機(jī)制和預(yù)防早衰奠定基礎(chǔ)，具有重要的理論意義和臨床價(jià)值。
　　本研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于:1）使用D-半乳糖注射法對(duì)C57品系p20