TRAIL信號途徑在多囊卵巢綜合征大鼠卵泡發(fā)育中的作用機制研究.pdf

1、第一部分多囊卵巢綜合征大鼠模型的建立
　　 目的：建立一種理想的多囊卵巢綜合征(PCOS)動物實驗?zāi)Ｐ汀?br>　　 方法：選用23日齡雌性SD大鼠，實驗組大鼠采用脫氫表雄酮(DHEA)硫酸鈉鹽制劑硫酸普拉睪酮鈉9mg/100g/日+注射用水0.4ml 皮下注射20天，對照組同期每日皮下注射0.4ml 注射用水，連續(xù)20天。分別觀察兩組大鼠卵巢外觀、重量、光鏡HE 染色形態(tài)學(xué)改變及透射電鏡卵巢超微結(jié)構(gòu)變化，測定血清睪酮(T)、

2、雌二醇(E2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.實驗組大鼠卵巢重量顯著高于對照組(P＜0.01)，肉眼可見卵巢表面較多囊性擴張的卵泡。
　　 2.光鏡HE 染色見實驗組大鼠有較多囊性擴張的卵泡，卵泡顆粒細胞層變薄，卵泡膜細胞增生，較少有黃體形成。
　　 3.透射電鏡觀察見實驗組大鼠卵巢顆粒細胞形態(tài)變形，呈梭形變，細胞核核形不整，核內(nèi)染色質(zhì)濃集。細胞間纖維增生，卵泡膜細胞層數(shù)增多

3、，膜細胞內(nèi)可見到脂滴。
　　 4.實驗組大鼠血清T和E2 濃度均顯著高于對照組﹙P＜0.05 ﹚。血清P 濃度較對照組偏低，PRL 濃度較對照組稍高，但差異無顯著性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)的雌性大鼠PCOS 動物模型卵巢病理形態(tài)學(xué)改變及血內(nèi)分泌改變與PCOS 病人相似，是較理想的PCOS 動物模型。
　　 第二部分多囊卵巢綜合征大鼠卵泡發(fā)育障礙與顆粒細胞凋亡的相關(guān)性
　　 目的：

4、探討PCOS大鼠卵泡發(fā)育障礙與顆粒細胞凋亡的相關(guān)性。
　　 方法：采用硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)大鼠PCOS 模型，透射電鏡及TdT介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標記(TUNEL)法檢測大鼠卵巢顆粒細胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.透射電鏡顯示，PCOS大鼠卵巢顆粒細胞表現(xiàn)出凋亡所特有的超微結(jié)構(gòu)變化，細胞核核膜皺縮，核形不整，核內(nèi)染色質(zhì)濃縮，線粒體腫脹，線粒體嵴斷裂甚至消失。
　　 在凋亡后期顆粒細胞內(nèi)可見典型的

5、半月形凋亡小體。
　　 2.TUNEL 法檢測PCOS組大鼠卵巢竇狀卵泡顆粒細胞凋亡發(fā)生率較對照組明顯增強(P＜0.01)，竇前卵泡顆粒細胞凋亡發(fā)生率兩組無顯著性差異(P>0.05)，兩組卵巢始基卵泡顆粒細胞未發(fā)現(xiàn)明顯凋亡征象。
　　 結(jié)論：PCOS大鼠卵巢竇狀卵泡顆粒細胞凋亡明顯增強，這可能是PCOS 卵巢中竇狀卵泡發(fā)育停滯的原因之一。
　　 第三部分TRAIL 及其受體DR4、DcR1在多囊卵巢綜合征大鼠卵泡

6、發(fā)育中的作用
　　 目的：探討TRAIL (腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體)及其受體DR4 (死亡受體4)、DcR1 (誘騙受體1)在PCOS大鼠卵泡發(fā)育中的作用。
　　 方法：采用硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)大鼠PCOS 模型，免疫組化染色、RT-PCR分析及Western blot分析觀察TRAIL 及其受體DR4、DcR1在PCOS大鼠卵巢顆粒細胞的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫組化結(jié)果顯示，PCOS

7、組大鼠卵巢竇狀卵泡顆粒細胞TRAIL蛋白的表達較對照組明顯增強(P＜0.05)，竇前卵泡顆粒細胞TRAIL蛋白的表達兩組無顯著性差異(P＞0.05)，兩組卵巢始基卵泡顆粒細胞未見TRAIL蛋白表達。RT-PCR 及Westernblot分析顯示，PCOS組大鼠卵巢顆粒細胞TRAIL mRNA 及TRAIL蛋白的表達較對照組明顯增強(P＜0.01)。
　　 2.免疫組化結(jié)果顯示，兩組大鼠竇前卵泡和竇狀卵泡顆粒細胞DR4蛋白的表達無

8、顯著性差異(P>0.05)，兩組卵巢始基卵泡顆粒細胞未見DR4蛋白表達。RT-PCR 及Westernblot分析顯示，兩組大鼠卵巢顆粒細胞DR4 mRNA 及DR4蛋白的表達無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.免疫組化結(jié)果顯示，PCOS組大鼠卵巢竇狀卵泡顆粒細胞DcR1蛋白的表達較對照組明顯減弱(P＜0.01)，竇前卵泡顆粒細胞DcR1蛋白的表達兩組無顯著性差異(P>0.05)，兩組卵巢始基卵泡顆粒細胞未見DcR1蛋白表

9、達。RT-PCR 及Western blot分析顯示，PCOS組大鼠卵巢顆粒細胞DcR1 mRNA 及DcR1蛋白的表達較對照組明顯減弱(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：TRAIL 及其受體DR4、DcR1在PCOS大鼠卵泡發(fā)育顆粒細胞凋亡中發(fā)揮了調(diào)控作用。TRAIL 及其受體DR4、DcR1在PCOS 顆粒細胞的表達異?？赡苁菍?dǎo)致PCOS卵泡發(fā)育障礙的機制之一。
　　 第四部分Caspase3在多囊卵巢綜合征大鼠顆粒細胞

10、的表達
　　 目的：探討TRAIL 信號途徑在PCOS大鼠卵巢顆粒細胞誘導(dǎo)凋亡的最終效應(yīng)階段。
　　 方法：采用硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)大鼠PCOS 模型，Western blot分析及RT-PCR分析觀察Caspase3 (半胱氨酸天門冬氨酸蛋白酶3)在PCOS大鼠卵巢顆粒細胞的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.Western blot分析顯示，PCOS組大鼠卵巢顆粒細胞活性Caspase3蛋白的表達較對照