補體C3a及C5a受體缺失延緩IgA腎病進展.pdf

1、目的:
　　（1）通過動物實驗驗證補體C3a、C5a及其受體在IgA腎病發(fā)病中的作用。
　　（2）探究補體C3a、C5a及其受體在IgA腎病發(fā)病中潛在作用機制。
　　材料和方法:
　?。?）6-8周清潔級雌性Balb/c小鼠36只，陰性對照組、野生型組、C3a受體敲除組、C5a受體敲除組各9只，其中后三組統(tǒng)稱為實驗組。
　　（2）采用有活性的仙臺病毒滴鼻經(jīng)鼻粘膜感染聯(lián)合尾靜脈注射建立小鼠IgA腎病模型，測定

2、24小時尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐。
　?。?）留取腎組織標本，通過直接免疫熒光法檢測腎組織IgA、C3沉積；采用PAS染色光鏡下觀察腎組織病理改變；采用RT-qPCR法檢測腎組織中TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相對表達量；采用免疫組織化學(xué)的方法檢測腎組織CD4+T細胞、CD8+T細胞及CD68+單核巨噬細胞浸潤及TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1等炎癥因子因子沉積情況

3、。
　　結(jié)果:
　?。?）15周后實驗組小鼠24小時尿蛋白量高于陰性對照組，且野生型組高于C3a受體敲除組及 C5a受體敲除組；各組間小鼠血清尿素氮及血清肌酐差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　?。?）實驗組小鼠腎組織可見局灶節(jié)段性腎小球系膜細胞增生，系膜基質(zhì)增多，部分小鼠腎組織可見腎小管上皮細胞腫脹，間質(zhì)有單核巨噬細胞浸潤等病理改變，且野生型組病變變較C3a受體敲除組及C5a受體敲除組明顯，陰性對照組腎臟組織未見明顯病理改變。

4、r>　?。?）實驗組小鼠腎組織TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相對表達量高于陰性對照組，同時野生型組高于C5a受體敲除組及C3a受體敲除組，另外IL-1β、IL-6、MCP-1的mRNA相對表達量C5a受體敲除組高于C3a受體敲除組。
　?。?）腎組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示四組小鼠腎間質(zhì)未見T細胞浸潤現(xiàn)象，但可見散在單核巨噬細胞浸潤，且實驗組陽性率高于陰性對照組；四組小鼠腎組織中IL-6及 IL

5、-1β主要沉積于腎小球系膜區(qū)及腎小管上皮細胞胞漿，MCP-1及TNF-α主要沉積于腎小管上皮細胞胞漿，TGF-β則主要沉積于腎小球系膜細胞核及腎小管上皮細胞細胞核。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)腎組織單核巨噬細胞浸潤及IL-6、IL-1β及MCP-1的表達量和蛋白尿呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　（1）C3a及C5a受體缺失可減少IgA腎病小鼠尿蛋白量，減輕IgA腎病腎組織損傷，并且C3a受體缺失對腎臟的保護作用更加明顯，提示C3a及C5a參與了